脂肪細(xì)胞基因表達(dá)的影響因素以及JNK在其中的作用.pdf

1、目的：脂肪細(xì)胞具有強(qiáng)大內(nèi)分泌功能，可以特異性分泌脂聯(lián)素(adiponectin)和抵抗素(resistin)等脂肪細(xì)胞因子(adipokines)，影響了胰島素代謝和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，參與肥胖和2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程。C-jun氨基端激酶(C-junNH2-terminalkinase，JNK)是絲裂原活化的蛋白激酶家族成員，它的激活影響了胰島素信號(hào)通路、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞凋亡。我們用適當(dāng)?shù)臈l件將3T3-L1脂肪前體細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細(xì)

2、胞，觀察不同濃度胰島素、葡萄糖等刺激對(duì)其adiponectin和resistin基因表達(dá)的影響，并通過抑制脂肪細(xì)胞中JNK蛋白活性探討其在肥胖和2型糖尿病相關(guān)的胰島素抵抗發(fā)生機(jī)制中的作用。 方法：1、3T3-L1脂肪前體細(xì)胞生長(zhǎng)接觸至單層后，采用0.5mMIMX+2uM地塞米松+10ug/ml胰島素誘導(dǎo)方案誘導(dǎo)其分化至一定天數(shù)，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、脂滴的形成。 2、利用熒光定量PCR技術(shù)，從基因表達(dá)水平研究不同濃

3、度胰島素、葡萄糖對(duì)脂肪細(xì)胞adiponectin和resistinmRNA表達(dá)的影響，并同時(shí)用特異性抑制劑SP600125抑制JNK蛋白活性，觀察脂肪細(xì)胞3adiponectin和resistin基因表達(dá)的變化。 結(jié)果：1、分化開始后的3T3-L1細(xì)胞從最初的梭形逐漸演變?yōu)閳A形，細(xì)胞體積增大，胞漿內(nèi)出現(xiàn)由少而多的脂滴，到第10天，平均有90﹪以上的前體細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，高倍鏡下可見透亮融合的脂滴。 2、與低濃度胰島

4、素組相比，給予高濃度胰島素(100nM)刺激分化成熟的3T3-L1細(xì)胞，其adiponectin基因表達(dá)明顯減少(P＜0.01)，resistin基因表達(dá)增加(P＜0.01)；同樣的，高濃度葡萄糖(25mM)對(duì)成熟脂肪細(xì)胞也產(chǎn)生類似效應(yīng)，使得adiponectin基因表達(dá)與低濃度葡萄糖組相比明顯降低(P＜0.01)，而resistin基因表達(dá)則增加(P＜0.01)；在使用SP600125抑制JNK后高濃度胰島素刺激組與不加抑制劑的單純高

5、濃度胰島素刺激組相比，其adiponectin基因表達(dá)明顯升高(P＜0.01)，resistin表達(dá)則降低(P＜0.01)；而抑制劑加高濃度胰島素刺激組與單純低濃度胰島素組相比，adiponectin基因表達(dá)仍然降低(P＜0.05)，resistin基因表達(dá)升高(P＜0.05)；同時(shí)SP600125抑制后用高濃度葡萄糖(25mM)刺激脂肪細(xì)胞，其adiponectin基因表達(dá)與單純高濃度葡萄糖刺激組相比要也明顯升高(P＜0.01)，re

6、sistin基因表達(dá)降低(P＜0.01)；與單純低濃度葡萄糖組相比，抑制劑加高濃度葡萄糖刺激組其adiponectin基因表達(dá)仍降低(P＜0.05)，resistin基因表達(dá)仍增加(P＜0.05)。抑制劑加低濃度胰島素或葡萄糖刺激組，與各自單純低濃度組相比，兩個(gè)基因的表達(dá)均4無明顯變化(P＞0.05)。 結(jié)論：1、上述脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化方案能使3T3-L1脂肪前體細(xì)胞有效分化，且分化均一，分化效率高，成熟時(shí)(10-12天)細(xì)胞大而

7、圓，脂滴明顯，部分可融合成較大的脂滴。 2、胰島素對(duì)成熟脂肪細(xì)胞adiponectin和resistin的基因表達(dá)能產(chǎn)生明顯影響，并且與刺激濃度相關(guān)；葡萄糖對(duì)adiponectin和resistin兩基因在脂肪細(xì)胞的特異性表達(dá)也能產(chǎn)生與刺激濃度相關(guān)的影響。 3、JNK蛋白在胰島素和葡萄糖影響脂肪細(xì)胞表達(dá)adiponectin和resistin的過程中起到了介導(dǎo)作用，能部分扭轉(zhuǎn)高濃度胰島素或葡萄糖刺激對(duì)脂肪細(xì)胞的基因表達(dá)的