內(nèi)皮抑素和E-V比值在大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、目的：結(jié)合前期有關(guān)大鼠脊髓缺血再灌注損傷后血清中內(nèi)皮抑素(endostatin，ES)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的相關(guān)性研究結(jié)果，探討大鼠腦缺血再灌注損傷后腦組織內(nèi)皮抑素與VEGF的表達(dá)和相關(guān)性。 方法：將48只雄性成年wistar大鼠隨機(jī)分為2組：假手術(shù)組即A組(n=8)、腦缺血模型組即B組(n=40)。其中B組又根據(jù)再灌注后觀察時(shí)間不同分為5個(gè)亞組：B

2、1～B5組，分別對(duì)應(yīng)再灌注后觀察6小時(shí)、1天、2天、4天、7天，每組n=8。采用改良的Zea Longa線栓法，建立大鼠左側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)缺血再灌注模型。A組大鼠手術(shù)后1天、B組大鼠再灌注達(dá)到相應(yīng)的觀察時(shí)間點(diǎn)時(shí)，將大鼠處死后斷頭取腦，取梗死灶腦組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。 方法如下： 1、參照Zea Longa 5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，分別在再灌注后各觀察時(shí)間段對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。 2、斷頭取腦后利用triphen

3、yl tetrazolium chloride(TTC)染色觀察各組大鼠腦梗死情況。 3、RT-PCR(real time polymerase chain reaction)技術(shù)檢測(cè)大鼠腦組織中VEGF以及內(nèi)皮抑素的mRNA表達(dá)，計(jì)算二者的比值即E/V值。 所有數(shù)據(jù)均采用x士s表示，采用SPSS13.0分析軟件，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)及方差分析，三組以上均數(shù)有顯著性差異時(shí)，采用兩兩比較q檢驗(yàn)，神經(jīng)功能評(píng)分與E/V值相關(guān)性作

4、直線相關(guān)分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、大鼠神經(jīng)功能評(píng)分A組大鼠再灌注一天內(nèi)未出現(xiàn)任何神經(jīng)功能癥狀，評(píng)分為0分：B組中，再灌注6h、1d時(shí)，7只大鼠爬行時(shí)向右側(cè)轉(zhuǎn)圈(2分)，一只向右側(cè)傾倒(3分)，評(píng)分2.125±0.354；再灌注2d，大鼠神經(jīng)功能明顯異常，其中5只大鼠無自主活動(dòng)(4分)，3只向右側(cè)傾倒(3分)，評(píng)分3.625±0.518；而再灌注4d、7d時(shí)評(píng)分多為2分，評(píng)分分別2.375±0.51

5、8、2.250±0.463。相對(duì)于A組，B組中各亞組神經(jīng)功能評(píng)分均增高(P<0.01)。 2、TTC染色結(jié)果TTC染色后，A組大鼠雙側(cè)大腦呈現(xiàn)均勻的紅色，未見白色梗死灶；B組大鼠右側(cè)大腦和A組一致，左側(cè)顯示不同程度的缺血情況，出現(xiàn)蒼白色的梗死灶。再灌注6h，大鼠左腦略腫脹，出現(xiàn)小面積梗死灶；再灌注1d時(shí)梗死灶較明顯，且多見于皮質(zhì)；再灌注2d時(shí)缺血情況最為嚴(yán)重，左腦呈現(xiàn)大片蒼白色梗死灶；再灌注4d與7d時(shí)腦水腫有所減輕，但梗死灶仍

6、然清晰可見。 3、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)腦組織中VEGF mRNA以及內(nèi)皮抑素mRNA的表達(dá)。 以A組為參照， VEGF mRNA表達(dá)量為1，B組大鼠腦組織中VEGF mRNA表達(dá)變化明顯，再灌注6h時(shí)即有所升高(2.499±0.399，P<0.05)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，在1d時(shí)達(dá)到高峰(4.243±0.352)，與A組相比，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；再灌注2d時(shí)有所回落(1.321±0.215)，而4d(1.647±

7、0.264)、7d(1.920±0.253)時(shí)又有再次升高的趨勢(shì)(P<0.05)。而B組內(nèi)比較，再灌注1d時(shí)VEGF的mRNA表達(dá)相對(duì)其余亞組均較高(P<0.05)，其余各亞組間差別不大。 而內(nèi)皮抑素mRNA的表達(dá)較VEGF遲，相對(duì)于A組(表達(dá)量為1)，再灌注6h時(shí)無明顯變化(0.989±0.308，P>0.05)，但1d時(shí)明顯升高(3.229±0.247，P<0.01)，2天時(shí)達(dá)高峰(7.301±0.242，P<0.01)，4

8、d(4.614±0.372)、7d(4.414±0.291)時(shí)有所回落，但仍維持在較高水平，與A組比較表達(dá)明顯增高(P<0.01)。各亞組間比較，再灌注2d時(shí)內(nèi)皮抑素mRNA的表達(dá)相對(duì)最高(P<0.01)。 B組內(nèi)皮抑素與VEGF的比值即E/V值，A組E/V值為1，再灌注6h(0.389±0.066)、1d(0.762±0.036)時(shí)略有降低，此后逐漸升高，2d時(shí)E/V值上升明顯(5.588±0.786，P<0.01)，4d(2

9、.850±0.377)、7d(2.323±0.257)時(shí)有所下降，相對(duì)A組仍然較高(P<0.05)。各亞組間比較，再灌注2d時(shí)E/V值高于其余組(P<0.01)，而4d、7d時(shí)高于6h、1d組(P<0.05)。經(jīng)直線相關(guān)分析，腦缺血再灌注損傷后大鼠神經(jīng)功能評(píng)分和E/V值正相關(guān)程度密切(r=0.811)。 結(jié)論：腦缺血90分再灌注后，大鼠神經(jīng)功能明顯異常，尤其是再灌注2d時(shí)，神經(jīng)功能評(píng)分最高。根據(jù)再灌注時(shí)間的不同，大鼠左側(cè)腦組織呈

10、現(xiàn)不同程度的缺血狀況，2d時(shí)可見大片蒼白色梗死灶。腦組織中VEGF mRNA．的表達(dá)，再灌注6h即有升高，并且在1d時(shí)達(dá)到高峰，但2d后明顯回落；而內(nèi)皮抑素mRNA的表達(dá)較’VEGF遲，2d時(shí)最高，此后略有回落。二者的比值即E/V在再灌注早期有所降低，但在2d時(shí)上升明顯，隨后有所下降。E/V值與大鼠神經(jīng)功能評(píng)分是密切相關(guān)的。 總之，大鼠腦缺血再灌注過程中，內(nèi)皮抑素與VEGF的平衡性，即E/V值高低的變化，與大鼠腦損傷而導(dǎo)致的神經(jīng)