抗腫瘤新藥S14161及其衍生化合物BENC-511抗前列腺癌的藥理作用研究.pdf

1、目的：PI3K/Akt信號(hào)通路是前列腺癌的一個(gè)重要治療靶標(biāo),而S14161是本課題組前期篩選出的一個(gè)PI3K抑制劑,對(duì)惡性血液病等多種腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的凋亡誘導(dǎo)作用。為了進(jìn)一步提高其抗腫瘤活性,我們對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)優(yōu)化,得到一系列衍生物,其中BENC-511具有更強(qiáng)的抑制PI3K的活性。本課題中我們將比較S14161和BENC-511這兩種化合物對(duì)雄激素非依賴型前列腺癌細(xì)胞株(PC3和DU145)的抑制作用及機(jī)制,并在裸鼠移植瘤模型中分析

2、兩種化合物的藥效,從而為研發(fā)抗前列腺癌的新藥提供一定的參考。
　　方法：
　　1.觀察S14161和BENC-511處理前列腺癌細(xì)胞(PC3和DU145)后細(xì)胞形態(tài)的變化,MTT法檢測(cè)兩種化合物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用;
　　2.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)兩種化合物對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響,并通過蛋白免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化;
　　3.蛋白免疫印跡法檢測(cè)兩種化合物對(duì)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)及磷

3、酸化的影響;
　　4.建立 NOD/SCID裸鼠的皮下接種前列腺癌的移植瘤模型,在體內(nèi)水平分析兩種化合物對(duì)前列腺癌的抑制作用;
　　5.用轉(zhuǎn)染技術(shù)使PTEN缺失的PC3細(xì)胞表達(dá)PTEN蛋白,檢測(cè)PC3對(duì)化合物敏感程度的變化。
　　結(jié)果：
　　1.S14161和BENC-511均能抑制多種實(shí)體瘤細(xì)胞株的存活,MTT實(shí)驗(yàn)表明兩種化合物均能抑制前列腺癌細(xì)胞PC3和DU145的增殖,該抑制作用呈濃度的依賴性,但是PC3對(duì)

4、BENC-511更為敏感;
　　2.S14161與BENC-511均能顯著誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞的凋亡,而BENC-511誘導(dǎo)凋亡的能力明顯強(qiáng)于S14161;此外,PC3細(xì)胞株對(duì)這兩種化合物的敏感程度顯著高于DU145細(xì)胞株;這兩種化合物均能誘導(dǎo)凋亡標(biāo)志蛋白PARP和Caspase-3的激活,并呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系;
　　3.S14161能在PC3細(xì)胞株中顯著抑制PI3K信號(hào)通路的活化及信號(hào)傳導(dǎo),但是對(duì)DU145細(xì)胞株的抑制作用則不

5、明顯;而BENC-511不但能對(duì)PC3細(xì)胞株(PTEN缺失型)的PI3K通路產(chǎn)生更強(qiáng)的抑制作用,也能對(duì)DU145細(xì)胞株產(chǎn)生一定的抑制作用;
　　4.S14161和BENC-511均能在抑制裸鼠體內(nèi)PC3及DU145的移植瘤生長(zhǎng),但是BENC-511對(duì)腫瘤的抑制作用要強(qiáng)于S14161;此外,這兩種化合物均能抑制腫瘤組織中的Akt的磷酸化,并能促進(jìn)PARP的剪切激活;
　　5.PC3是PTEN缺失型前列腺癌細(xì)胞,在PC3細(xì)胞中重

6、新表達(dá)PTEN蛋白后,化合物誘導(dǎo)PARP的剪切程度下降,PC3對(duì)化合物BENC-511的敏感性下降。
　　結(jié)論：S1416和BENC-511能顯著誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3和DU145的凋亡,抑制PI3K/Akt通路的激活及信號(hào)傳導(dǎo),并且BENC-511的作用強(qiáng)于其母體化合物S14161;PC3和DU145對(duì)這兩種化合物的敏感性存在一定差異,原因可能是PC3是PTEN缺失型的細(xì)胞株,它的PI3K/Akt通路異?；罨?更易被此通路的藥