在糖分子水平上研究維生素A缺乏對(duì)大鼠心臟及其主動(dòng)脈發(fā)育的影響.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分：維生素A缺乏大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?目的：建立維生素A缺乏(VitaminADeficiency，VAD)幼鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑸榫S生素A缺乏的進(jìn)一步研究提供合適的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。 方法：取出生30天的清潔級(jí)Wistar雌鼠20只，飼養(yǎng)于開放系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)組10只，對(duì)照組10只。按照AIN-76TM配方配制VAD飼料，VAD飼料通過HPLC檢測維生素A的含量；實(shí)驗(yàn)組飼喂VAD飼料，對(duì)照組飼喂正常飼料；飼喂

2、兩個(gè)月后同健康Wistar雄鼠交配，觀察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組幼鼠的出生率、發(fā)育過程中死亡率以及出生后的生長曲線。 結(jié)果：VAD飼料經(jīng)高效液相色譜(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)檢測，維生素A含量為4μg/100g，證實(shí)飼料VAD。VAD飼料飼養(yǎng)8W后，出現(xiàn)維生素A缺乏癥狀，表現(xiàn)為毛色無光澤，神情淡漠，不活躍，眼角周圍有分泌物，發(fā)紅，感染等。實(shí)驗(yàn)組母鼠平均產(chǎn)仔4.7±3.68只，明顯低

3、于對(duì)照組平均產(chǎn)仔15.60±1.07只(P＜0.001)：發(fā)育的過程中實(shí)驗(yàn)組子鼠死亡率19.1％明顯高于對(duì)照組死亡率0.6％(P＜0.001)；實(shí)驗(yàn)組子鼠生長曲線較平坦，生后各時(shí)間點(diǎn)體重均較對(duì)照組低(P＜0.001)。 結(jié)論：本研究成功建立了幼鼠維生素A缺乏模型，適合用來研究先天性維生素A缺乏仔鼠的生長發(fā)育相關(guān)的可能生物學(xué)機(jī)制。對(duì)先天性VAD幼鼠生長發(fā)育的連續(xù)觀察，為VAD幼鼠的研究提供了可能的生長發(fā)育指標(biāo)。本模型操作簡便，可重

4、復(fù)性佳。 第二部分：Fut8在VAD初生鼠心臟主動(dòng)脈中的變化及意義 目的：研究α-1,6巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(α-1，6fucosyltransferase，α-1，6FucT，F(xiàn)ut8)在VAD幼鼠心臟主動(dòng)脈中的表達(dá)特征；探討VAD對(duì)大鼠心血管發(fā)育的影響及其在糖分子水平上的可能生物學(xué)機(jī)制。 方法：實(shí)驗(yàn)組(VAD組)和正常對(duì)照組初生幼鼠分別于各發(fā)育時(shí)間點(diǎn)頸椎脫臼法處死，收集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組出生后(1d，10d，20d，3

5、0d，60d)的心肌及主動(dòng)脈組織。另外分別取出生1天和10天的兩組中的初生鼠的心臟及主動(dòng)脈組織，放入預(yù)冷的4％多聚甲醛固定，石蠟包埋切片后，用HE(蘇木素-尹紅)染色觀察缺維生素A初生大鼠的心肌及其大血管的形態(tài)變化；用免疫組化染色檢測α-1，6FucT在出生后10天幼鼠心肌及其主動(dòng)脈中的表達(dá)情況；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)，檢測實(shí)驗(yàn)組和

6、對(duì)照組初生鼠的心臟不同大血管發(fā)育點(diǎn)的α-1，6FucT基因(Fut8)在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)特征。采用LCA(小扁豆凝集素)凝集素印跡方法檢測實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組初生鼠10d時(shí)心血管在蛋白水平上α-1，6FucT的表達(dá)特征。 結(jié)果：心肌及心血管的HE染色顯示VAD組幼鼠的心肌細(xì)胞和對(duì)照組比較，VAD組的心肌細(xì)胞胞核變疏松；VAD組幼鼠的血管內(nèi)皮細(xì)胞變得不規(guī)則，散亂。免疫組化染色顯示α-1,6FucT在血管中主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，VAD

7、組免疫組化相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度201.33±8.96，對(duì)照組為123.67±5.51，VAD組明顯高于對(duì)照組(P＜0.001)。RT-PCR檢測顯示Fut8基因在對(duì)照組和VAD組的心血管中均有表達(dá)，并且在幼鼠的不同發(fā)育階段中表達(dá)無明顯差異：但是在同等上樣量的情況下，VAD組Fut8的表達(dá)高于對(duì)照組。LCA凝集素印跡顯示在蛋白水平上，正常對(duì)照組10d血管組織和VAD組10d血管組織中的糖蛋白均可表達(dá)，但是VAD組中表達(dá)更強(qiáng)。 結(jié)論：當(dāng)維生