小豆蔻明保護(hù)精子體外氧化損傷的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：生理水平的ROS（reactive oxygen species）是維持男性正常生殖功能所必須的，但是過(guò)量的ROS容易引起氧化應(yīng)激損傷。P38MAPK（mitogen-activated protein inase，MAPK）是哺乳動(dòng)物內(nèi)廣泛存在的一類(lèi)絲/蘇氨酸蛋白激酶,在凋亡、細(xì)胞因子產(chǎn)生、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及細(xì)胞骨架識(shí)別中起著重要作用。研究表明小豆蔻明（Cardamonin，CAR）能夠明顯抑制P38MAPK磷酸化。本課題旨在考察CA

2、R是否可以保護(hù)氧化損傷的精子，并探討其可能的機(jī)制，以期尋找一種安全有效的治療男性不育的藥物。
　　方法：⑴精子懸液分為6組：正常對(duì)照組，加入Earle’s培養(yǎng)液；LPS組，加入LPS；LPS+CAR(0.5μM)組；LPS+CAR(1μM)組；LPS+CAR(2μM)組；LPS+Vic(2μM)組。LPS的終濃度為1μg·mL-1。各組樣本置于37℃,5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15h。⑵測(cè)定指標(biāo)及方法：倒置相差顯微鏡測(cè)定精子總活力；倒

3、置相差顯微鏡測(cè)定精子尾部低滲膨脹率；熒光顯微鏡觀(guān)察精子頂體完整率；熒光顯微鏡測(cè)定DFI；流式細(xì)胞儀檢測(cè)精子凋亡率；NBT比色法測(cè)定活性氧含量；TBA法測(cè)定丙二醛(MDA)含量；WST法測(cè)定超氧化物歧化酶（SOD）活性；Western-Blot法檢測(cè)P38MAPK、p-P38MAPK蛋白的表達(dá)
　　結(jié)果：①在脂多糖誘導(dǎo)的氧化損傷中，CAR明顯提高精子活力以及降低凋亡率和DFI（P<0.01）；并且CAR顯著提高精子膜低滲彭脹率和頂體

4、完整率（P<0.01），其中高劑量組CAR的作用較強(qiáng)；②CAR顯著降低ROS含量和MDA含量，并且明顯提高SOD活力（P<0.05），其中高劑量組CAR的作用較強(qiáng)；③CAR可劑量依賴(lài)性抑制LPS刺激引起的P38MAPK磷酸化（P<0.05）,并且CAR對(duì)P38MAPK總蛋白的表達(dá)無(wú)顯著性影響；④LPS組的P38MAPK磷酸化表達(dá)量以及ROS含量與正常對(duì)照組相比均顯著升高（P<0.05），并且P38MAPK的磷酸化表達(dá)量與ROS的含量呈正