2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、[研究背景及目的] 胰島素抵抗(InsulinResistance,IR)是糖尿病、高血壓、動脈粥樣硬化等疾病的共同病理生理基礎(chǔ),常引起中央或外周血管結(jié)構(gòu)和功能的改變,導(dǎo)致血管張力的異常增加以及血管平滑肌細(xì)胞(VascularSmoothMuscularCells,VSMCs)的異常增殖。因此,改善IR,逆轉(zhuǎn)或抑制VSMCs增殖是防治血管增殖性疾病的重要措施。 哺乳類雷帕霉素靶蛋白(MammalianTargetOfRa

2、pamycin,mTOR)為胰島素(Insulin,Ins)信號通路中的重要分子,參與基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)起始翻譯、核糖體生物合成及細(xì)胞增殖等多種生物學(xué)效應(yīng),是細(xì)胞生長過程中極為重要的靶標(biāo)。研究表明,血管增殖性疾病、代謝綜合癥等諸多疾病的發(fā)生發(fā)展均與mTOR的表達及功能改變有關(guān)。常用的抗排斥藥物雷帕霉素(Rapamycin,RAP)為mTOR特異性抑制劑,能夠抑制VSMCs增殖,提示mTOR可能成為防治血管增殖性病變的重要靶標(biāo)。然而,RAP

3、主要用于抗移植排異,不良反應(yīng)較多,限制全身性應(yīng)用。中藥資源豐富,基于mTOR篩選抑制抗增殖的中藥有效成分的研究,國內(nèi)外少見。因此,以mTOR為靶標(biāo)改善IR所致血管病變的藥物研發(fā)具有廣闊前景。 小豆蔻明(Cardamonin,Car)為豆蔻屬植物中的查爾酮類單體,化學(xué)結(jié)構(gòu)為2,4-雙羥基-6’甲氧基查爾酮。研究顯示,Car具有心血管保護作用,能明顯舒張血管。目前,Car在IR狀態(tài)下對VSMCs增殖影響的研究國內(nèi)外少有報道。本研究以

4、高糖高胰島素模擬IR狀態(tài)培養(yǎng)人臍動脈平滑肌細(xì)胞(HumanUmbilicalArterySmoothMuscleCells,HUASMCs),探討Car對高糖高胰島素誘導(dǎo)HUASMCs增殖的影響,通過檢測mTOR及其結(jié)合蛋白Raptor、Rictor的mRNA表達,深入探討Car抑制細(xì)胞增殖的作用機制,同時考察Car免疫抑制活性,為尋找改善IR、治療血管增殖性病變的藥物提供實驗基礎(chǔ)。 [方法] 1.細(xì)胞培養(yǎng) 采用

5、組織貼塊法培養(yǎng)原代HUASMCs,傳代細(xì)胞分別用含10%小牛血清的正常RPMI1640培養(yǎng)基和高糖高胰島素模擬IR培養(yǎng)基(含2.5mol·L-1葡萄糖和100U·L-1胰島素的RPMI1640培養(yǎng)基)在37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 采用密度梯度離心法分離健康人外周血淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞用含10%小牛血清的正常RPMI1640培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2.分組與給藥 HUASMC

6、s按正常培養(yǎng)和模擬IR培養(yǎng)后,分別設(shè)細(xì)胞對照組、PD98059(3×10-5mol·L-1)組、PD98059+LY294002(10-5mol·L-1)組、PD98059+LY294002+PA(10-4mol·L-1)組、RAP(10~mol·L-1)組及Car(10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1、10-5mol·L-1、10-4mol·L-1)組。 人淋巴細(xì)胞按正常培養(yǎng)及PHA(5mg·

7、L-1)刺激培養(yǎng)后,設(shè)細(xì)胞對照組、PHA組、陽性藥物RAP及CsA(10-1mol·L-1、10-5mol·L-1)對照組、Car(10-7mol·L-1、3×10-7mol·L-1、10-6mol·L-1、3×10-6mol·L-1、10-5mol·L-1、3×10-5mol·L-1、10-4mol·L-1)組。 3.測定指標(biāo) 經(jīng)不同試藥處理3d,用不含細(xì)胞的培養(yǎng)基空白孔調(diào)零,MTT法(λ=490nm)測定HUASMC

8、s增殖。采用ELISA法測定人淋巴細(xì)胞分泌的IL-2水平。利用Trizol試劑,一步法提取HUASMCs總RNA,經(jīng)Real-timePCR擴增mTOR、Raptor和Rictor,以β-actin作內(nèi)參,采用Livak法計算mRNA表達量。 [結(jié)果] 1.高糖高胰島素培養(yǎng)基較正常培養(yǎng)基明顯促進HUASMCs的增殖(0.545±0.028vs0.422±0.047,P<0.01)。對于正常及模擬IR培養(yǎng)的HUASMCs,

9、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1Car對細(xì)胞增殖無影響,高劑量Car(10-5mol·L-1、10-4mol·L-1)抑制細(xì)胞增殖(P<0.01)。PD98059抑制HUASMCs增殖,RAP及Car(10-4mol·L-1)能加強該作用(P<0.05,P<0.01)。同時加入PD98059及LY294002,并進一步采用PA誘導(dǎo)HUASMCs增殖,該作用可被RAP及高低劑量Car(10-6mol·

10、L-1、10-4mol·L-1)所阻斷(P<0.05,P<0.01),且高劑量Car作用較RAP對照更為顯著(P<0.01)。 2.預(yù)先給予PD98059,RAP及Car(10-6mol·L-1、10-5mol·L-1)能明顯降低正常培養(yǎng)及模擬IR狀態(tài)下HUASMCs中mTORmRNA的表達。RAP、Car(10-6mol·L-1、10-5mol·L-1)對正常培養(yǎng)的HUASMCs中RaptormRNA的表達均具有抑制作用。對于

11、模擬IR培養(yǎng)的HUASMCs,RAP、Car(10-5mol·L-1)則呈促進作用。在正常培養(yǎng)狀態(tài)下,RAP對HUASMCs中RictormRNA的表達具有抑制作用,Car(10-6mol·L-1、10-5mol·L-1)作用相反,表現(xiàn)為促進表達;在模擬IR狀態(tài)下,RAP、Car(10-5mol·L-1)均對RictormRNA的表達呈促進作用。 同時加入PD98059及LY294002,PA可明顯促進HUASMCs中mTORm

12、RNA的表達,且RAP、Car(10-5mol·L-1)可抑制該作用,Car(10-6mol·L-1)對mTORmRNA的表達無影響。在兩種培養(yǎng)模式下,使用PD98059和LY294002后,Raptor及RictormRNA的含量顯著降低。利用PA刺激,二者mRNA表達顯著增加。RAP對正常培養(yǎng)狀態(tài)下Raptor及RictormRNA的表達具有促進作用,但在IR狀態(tài)下則表現(xiàn)為相反作用。Car(10-5mol·L-1)對二者的表達不論是

13、在正常還是模擬IR狀態(tài)下,均呈現(xiàn)抑制作用。 3.PHA可增加人淋巴細(xì)胞活性,促進IL-2分泌(10.400±0.582vs15.575±0.794,P<0.01)。Car對正常培養(yǎng)及PHA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞活性呈現(xiàn)濃度依賴性,Car(10-5mol·L-1、3×10-5mol·L-1)不明顯影響IL-2分泌。 [結(jié)論] 低劑量Car對血清誘導(dǎo)正常及模擬IR狀態(tài)培養(yǎng)的HuASMCs無影響,而高劑量抑制增殖。在模擬胰島素

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