DAP1介導(dǎo)小豆蔻明調(diào)控卵巢癌細(xì)胞自噬的研究.pdf

1、目的:
　　1.考察死亡相關(guān)蛋白1（death-associated protein1，DAP1）介導(dǎo)小豆蔻明（cardamonin，CAR）對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖及自噬的影響；
　　2.研究小豆蔻明治療卵巢癌的作用機(jī)制，為研發(fā)新型mTOR靶向抗腫瘤藥物提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)
　　人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株及脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染DAP1 siRNA的SKOV3細(xì)胞在含10％胎牛血清、100 U·

2、mL-1青霉素及100μg·mL-1鏈霉素的McCoy's5A培養(yǎng)液，37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),長(zhǎng)滿(mǎn)至70%-80%時(shí)胰蛋白酶消化傳代。
　　2.分組與給藥
　　兩種細(xì)胞均設(shè)立空白組、CAR組（10、20μmol·L-1）及陽(yáng)性對(duì)照藥雷帕霉素（rapamycin，RAP）組（0.1μmol·L-1）。
　　3.測(cè)定指標(biāo)及方法
　　3.1倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)；
　　3.2 M

3、TT法（λ=490 nm）測(cè)定細(xì)胞增殖；
　　3.3 MDC染色法檢測(cè)細(xì)胞自噬水平；
　　3.4Western Blot法檢測(cè)DAP1、LC3蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.成功轉(zhuǎn)染DAP1 siRNA至SKOV3細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞DAP1 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低；
　　2.轉(zhuǎn)染DAP1 siRNA細(xì)胞較SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)變緩；
　　3.CAR抑制SKOV3及轉(zhuǎn)染DAP1 siRNA SKOV3細(xì)