MDM2-p53反饋環(huán)對卵巢癌細胞藥敏性的影響及機制.pdf

1、[目的]:卵巢癌是惡性度最高的婦科腫瘤之一,其病死率居婦科腫瘤之首,嚴重威脅著婦女的健康和生命安全,其治療以手術和化療為主,但晚期卵巢癌五年生存率仍低于30％,導致卵巢癌化療失敗的主要原因是卵巢癌細胞對化療藥物產生耐藥性.順鉑耐藥與否,患者的平均生存時間和復發(fā)率有顯著差別.提高卵巢癌的化療敏感性,降低化療耐藥尤其是對最常用的化療藥物順鉑的耐藥性是改善臨床預后的關鍵,因此,從基因水平尋求新型有效的治療方案是當今腫瘤研究的熱點.為探討此藥敏

2、性發(fā)生改變的機理,我們通過流式細胞技術檢測A2780的細胞周期,A2780-MDM2細胞在給以順鉑治療后,G<,1>期明顯縮短,而S期明顯延長,從而使己受順鉑損傷的卵巢癌細胞進入S期而導致死亡,因而對順鉑的敏感性增加.A2780在給予順鉑治療后,出現了明顯的G<,2>期阻滯,這使受到順鉑損傷的細胞在進入關鍵的M期前修復,因而降低了順鉑對A2780卵巢癌細胞的殺傷作用.順鉑發(fā)揮殺傷腫瘤細胞的作用機理是導致細胞內順鉑-DNA復合物的形成和通

3、過使DNA鏈內和雙鏈之間的纏繞變形而導致損傷,而這種損傷主要由p53介導的核苷酸切除反應(nucleotide excision repair,NER)修復,因此我們利用原子吸收光譜儀測定DNA中的鉑量以進行DNA-順鉑結合及修復檢測、宿主細胞重激活實驗(HCR)等直接測試在轉染了MDM2的細胞中,DNA修復是否降低了.首先我們觀察了A2780-MDM2和A2780-V細胞DNA的鉑結合量.在順鉑作用2小時,結合量相似,即二者的順鉑吸收

4、率相同.然而在隨后的時間點A2780-MDM2的順鉑-DNA結合量較A2780-V增加更多,提示A2780-MDM2的DNA切除修復反應失活,順鉑得以與A2780-MDM2細胞的DNA結合,因而使細胞無法進行復制和分裂.由于順鉑導致的DNA損傷會顯著阻滯RNA多聚酶Ⅱ的轉錄過程,因此,編碼了某種酶(氯霉素乙酰基轉移酶)的報告質粒受損傷后,再轉染至DNA修復缺陷的細胞,則失活而不表達其攜帶的報告基因.那么受損傷報告質粒的重激活便成為衡量某

5、一特定細胞系DNA修復能力的指標.在該研究中,我們用被順鉑損傷的pCAT(R)3報告質粒以衡量細胞對順鉑導致的DNA損傷的修復能力.結果提示,在A2780-MDM2細胞,對被順鉑損傷的報告基因的修復下降,即其核苷酸切除修復反應下降,因而藥敏性增加.[結論]:MDM2轉染于p53為野生型的A2780細胞中導致細胞對順鉑的藥敏性增加.但在無p53表達的SKOV-3組,MDM2對細胞的藥敏性沒有影響.我們的結果說明MDM2-p53反饋環(huán)可以改