女性淋球菌無癥狀感染的相關因素研究.pdf

1、本研究分為四部分：
　　 第一部分：淋球菌的基因分型、毒力島分類及與女性無癥狀感染關系的研究
　　 目的：評價Opa分型及NG-MAST對淋球菌分離株進行基因分型的能力及性伴侶分離淋球菌基因型別之間的關系，研究淋球菌不同基因型別的毒力島類型及其所引起女性無癥狀感染關系。
　　 方法：12對性接觸者淋球菌分離株培養(yǎng)鑒定后Opa基因以Hpa II酶切及聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染顯色分析；12 株男性標本和81 株女性標本

2、PCR 擴增por和tbpB后測序用NG-MAST方法從分子水平上進行基因分型，并用ClustalX軟件做進化樹分析；并對毒力島分類與女性無癥狀感染關系進行了研究。
　　 結果：12對性接觸患者分離株中，NG-MAST 區(qū)分出10種ST型，而使用Opa分型則呈現(xiàn)12種OT型；新發(fā)現(xiàn)的ST(217-679)是國內特有的流行株。武漢地區(qū)女性感染的81 株野生株中，GGI 陽性菌株占了64 株（80.43%)；無癥狀組有GGI 陽性株

3、也有GGI 陰性株，有癥狀組也是如此。
　　 結論v患者-性伴組除了45/46之外每對菌株的ST型及OT型均相同,表明患者與性伴相互接觸傳染。Opa-typing 及NG-MAST可區(qū)分性關系網(wǎng)中的淋球菌菌株，二種方法分型結果總的趨向一致。Opa分型能力高于NG-MAST，ST型別可進一步的分成opa-types (OT)亞型。GGI 毒力島與女性癥狀感染之間并無明顯的相關性，即女性有膿性分泌物感染并不是感染了強毒力的菌株所致。

4、
　　 第二部分：衣原體感染、性激素水平等因素與女性無癥狀感染關系的研究
　　 目的：探討女性淋球菌感染癥狀與衣原體感染及體內性激素水平等因素之間的關系。
　　 方法：選擇136例無明顯癥狀女性淋病患者為觀察組，45例有癥狀者為對照組，檢測宮頸分泌物衣原體及淋球菌DNA；放射免疫法測定E2和P 濃度；用RT-PCR和ELISA的方法在mRNA 水平和蛋白水平檢測炎癥因子TNF-α、IL-1 β的表達。用SPSS1

5、2.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：淋病的無明顯癥狀感染與衣原體感染無顯著相關性，但其炎癥因子TNF-α、IL-1 β減少與血清孕激素水平升高的相關性具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：女性淋病患者體內孕激素水平的增高可能是導致無癥狀感染的重要原因。
　　 第三部分：孕激素體外調節(jié)Ngo-PMNs 炎癥反應的作用機制研究
　　 目的：選擇了有癥狀組和無癥狀組的非獨特NG-MAST 亞型各3種菌株，進一步研究

6、孕激素在這些淋球菌野生株引起的中性粒細胞炎癥反應的調節(jié)作用，探討其作用差異及信號轉導的可能機制。
　　 方法：分離人外周血中性粒細胞（PMNs），用免疫熒光和RT-PCR檢測PMNs 上PR的表達：細胞維持在含10%熱滅活胎牛血清的RPMI 培養(yǎng)液中，細胞濃度為5×106，淋球菌培養(yǎng)過夜后重懸在PBS中調整為OD600=0.15(～10 8 gonococci mL-1），感染復數(shù)(MOI)為10 bacteria/cell，在

7、孕激素作用的不同時段用熒光定量PCR的方法檢測iNOS,eNOS,TNF-a和IL-1 β的變化，用Western Blot 測定iNOS,eNOS，Akt和p-Akt (Ser473)蛋白水平，比較分析其差異。
　　 結果：我們通過RT-PCR和免疫熒光的方法發(fā)現(xiàn)人的外周中性粒細胞并不表達經(jīng)典的PR 受體；孕激素能抑制iNOS，TNF-α和IL-1 β的mRNA表達，在有癥狀組NgoST2951、ST735、ST436和無癥狀

8、組ST809、ST369、ST2948中并沒有顯著差別；孕激素顯著下調了iNOS 蛋白的表達水平，然而eNOS 蛋白沒有檢測到顯著的改變；在孕激素處理前后沒有能觀察到磷酸化的Akt 蛋白，總的Akt 也沒有改變。
　　 結論：孕激素的壓力導致PMNs中加劇iNOS表達的抑制和PMNs 前炎癥因子的下調，而這種作用是不依賴于PR介導受體途徑和Akt信號通路。
　　 第四部分：孕激素體外調節(jié)Ngo-PMNs 呼吸爆發(fā)、凋亡應

9、答的機制研究
　　 目的：研究孕激素體外調節(jié)淋球菌引起的中性粒細胞呼吸爆發(fā)和凋亡的作用。
　　 方法：分離人外周血中性粒細胞，分別用孕激素和十字孢堿處理，十字孢堿作為陽性對照。在0，3，8，12 小時等時段用熒光定量RT-PCR 分別測定各組中性粒細胞中凋亡抑制蛋白cIAP2和XIAP的表達水平；同時用流式細胞儀檢測PMNs 凋亡，用魯米諾化學發(fā)光法檢測淋球菌ST2951 株刺激PMNs后呼吸爆發(fā)。
　　 結果：

10、cIAP2 在孕激素處理3h后顯著上調而XIAP和ST2951+medium組相比上調輕微；cIAP2 在十字孢堿組是下調的。此外，我們發(fā)現(xiàn)孕激素對淋球菌ST2951 刺激后的中性粒細胞有明顯的延遲凋亡作用，尤其是在12h的時候；10ng/mL的孕激素對中性粒細胞的呼吸爆發(fā)并沒有顯著的影響，而十字孢堿加強了淋球菌刺激后中性粒細胞超氧負離子的產(chǎn)生。
　　 結論：孕激素對淋球菌引起的中性粒細胞炎癥反應有很重要的調節(jié)作用，孕激素介導的