用于呼吸道基因輸送的氣霧劑研究.pdf

1、病毒性呼吸道傳染疾病已成為全球范圍內(nèi)一個(gè)嚴(yán)重的公共健康安全問(wèn)題?；虔煼赡艹蔀樾碌挠行У目共《局委煵呗?。為達(dá)到好的基因治療效果，特別是針對(duì)呼吸道疾病的基因療法，必須找到有效的輸送載體和運(yùn)載方法。目前研究較多的非病毒載體，如脂質(zhì)體和膠束，均為水溶性，不能與氣霧劑中的拋射劑互溶，大大限制了氣霧劑在呼吸道疾病中的應(yīng)用。 本文研究了一種新型的脂質(zhì)基因復(fù)合物。我們首先采用油水兩相萃取系統(tǒng)，從有機(jī)相中萃取出通過(guò)靜電作用結(jié)合的質(zhì)粒DNA與脂

2、質(zhì)CDAN的復(fù)合物（反相膠束），然后對(duì)該制劑進(jìn)行了表征。通過(guò)凝膠電泳法結(jié)合紫外分光光度法測(cè)定其萃取率，用激光粒度測(cè)定儀測(cè)定粒徑，并采用原子力顯微鏡觀察反相膠束的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該制劑中質(zhì)粒DNA的攜帶率在80％以上，光強(qiáng)分布平均粒徑為150nm，可很好地溶于無(wú)水乙醚，分散到氟利昂拋射劑中得到澄明溶液。在灌裝為耐壓定量氣霧劑后，該制劑可隨拋射劑形成的氣霧噴出。進(jìn)一步的，我們根據(jù)《中國(guó)藥典》2005版二部規(guī)定的方法，考察了該反相膠束氣霧

3、劑的霧滴大小、噴霧形態(tài)、每撳重量、氣霧劑的內(nèi)容物比例、體外分布等。結(jié)果顯示，該氣霧劑可達(dá)到定量要求，霧滴顆粒大小在1~5μm之間。 本研究進(jìn)行了反相膠束氣霧劑在細(xì)胞和動(dòng)物模型中的基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，證明了其在保證細(xì)胞存活率的同時(shí)，具有高轉(zhuǎn)染效率。體外人體呼吸道模型的分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示了該氣霧劑的廣泛分布性。在動(dòng)物體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)中，熒光成像結(jié)果顯示，該反相膠束氣霧劑可廣泛分布于小鼠的呼吸道和肺部。細(xì)胞和動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)均證實(shí)了該制劑可以有效