HMG的實(shí)時(shí)干預(yù)對(duì)小鼠卵巢移植結(jié)局影響的研究.pdf

1、卵巢組織凍存與移植作為保存和恢復(fù)女性生殖功能的一種手段，給許多因POF或卵巢切除抑或先天卵巢發(fā)育不良而導(dǎo)致內(nèi)分泌失調(diào)、生育能力喪失的患者帶來(lái)了希望。卵巢皮質(zhì)片的凍存及解凍后的無(wú)血管吻合移植較整體卵巢的凍存和移植更簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、易于操作，且可以避免血管吻合后極易發(fā)生的血栓形成。但術(shù)后的缺血期及缺血－再灌注損傷常導(dǎo)致原始卵泡大量喪失，使得移植后卵巢成活率及功能低下，卵巢生存期縮短。有研究認(rèn)為卵巢組織移植后促性腺激素的分泌有助于移植物的血管重建

2、。 目的：探索體外及移植時(shí)HMG的干預(yù)對(duì)卵巢移植血管重建的影響及部分機(jī)制研究。 方法： 1.青春期小鼠半卵巢在含0.00IU/mL、0.15IU/mL、0.30IU/mL、0.60IU/mL的培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)12h、24h、48h后，通過(guò)免疫組織化學(xué)法，觀察卵巢組織VEGF表達(dá)； 2.將青春期小鼠半卵巢移植前在含0.00IU/mL、0.15IU/mL、0.30IU/mL、0.60IU/mL培養(yǎng)液體外培養(yǎng)3

3、h后進(jìn)行自體異位移植，通過(guò)墨汁灌注法觀察不同移植部位血管密度的區(qū)別；移植24h、36h卵巢血流貫通的時(shí)間及移植物周圍及移植物內(nèi)的組織液滲出量；移植72h卵泡凋亡蛋白陽(yáng)性表達(dá)率；移植1月后不同HMG干預(yù)濃度對(duì)卵泡存活的影響。 結(jié)果： 1.不同移植部位在HMG干預(yù)下血管化時(shí)間存在差異：腎組織血管密度（406.90±61.53）明顯大于頸部皮下組織（133.38±2.26），P<0.001；腎被膜下移植組24h可見(jiàn)有貫穿腎組織

4、至卵巢組織之間的血管，而頸部皮下移植組36h未見(jiàn)血供建立。腎被膜下移植組正常卵泡計(jì)數(shù)（9.38±5.82）較多，與頸部皮下移植組（5.57±1.12）相比差異具有顯著性，P<0.05； 2.不同HMG濃度對(duì)體外培養(yǎng)卵巢組織VEGF表達(dá)及移植后血管重建的差異：(1)干預(yù)組各培養(yǎng)時(shí)間段內(nèi)VEGF表達(dá)量均隨著HMG濃度的增大而升高。無(wú)干預(yù)組（0.00IU/mL HMG）、低濃度組（0.15IU/mL HMG）和中濃度組（0.30IU/

5、mL HMG）顯示培養(yǎng)12h表達(dá)量最多，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，VEGF表達(dá)量呈現(xiàn)微弱減少。而高濃度組（0.60IU/mL HMG）在各時(shí)間段均顯示最高的表達(dá)量，表達(dá)高峰出現(xiàn)在培養(yǎng)24h（95.52±12.05），表達(dá)量與其它各組相比差異均有顯著性，（P<0.001）。(2)不同HMG干預(yù)濃度對(duì)移植物的影響：①移植36h滲出面積隨著HMG干預(yù)濃度的增大而增大，高（0.08±0.04）、中（0.06±0.03）、低濃度（0.03±0.02）各

6、濃度組間差異均具有顯著性（P<0.001）；②中、高濃度干預(yù)組移植24h時(shí)，墨汁灌注法及免疫組化法均可見(jiàn)移植物與受體間建立血供，而移植36h時(shí)在低、中、高濃度干預(yù)組均可見(jiàn)有貫穿腎組織至卵巢組織之間的血管被墨汁填充。組織學(xué)觀察可見(jiàn)卵泡保存完好，可見(jiàn)各發(fā)育階段的卵泡； 3.HMG的短暫干預(yù)對(duì)移植卵巢卵泡發(fā)育的影響：①高濃度HMG組短暫干預(yù)后移植組72h正常卵泡計(jì)數(shù)及卵泡凋亡陽(yáng)性表達(dá)率：非干預(yù)培養(yǎng)移植組正常卵泡計(jì)數(shù)（CTG，5.00±

7、1.10）最低，與新鮮移植組（FTG，9.57±2.82）和高濃度組（HMG0.60-CTG，9.00±1.98）相比均具有顯著性差異，P<0.001；FTG與HMG0.60-CTG數(shù)量相似，P>0.05；CTG Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（48.08±19.84）最低，與其它各組相比均有顯著性差異，P<0.001；Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)率CTG最高（34.61±17.00），與FTG相比有顯著性差異，P<0.05；CTG Caspase-3

8、蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（54.41±44.10）最高，與其它各組相比有顯著性差異，P<0.05。Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白陽(yáng)性率HMG0.60-CTG與FTG相似，無(wú)顯著性差異。②移植后CTG動(dòng)情周期開(kāi)始天數(shù)較長(zhǎng)（6.83±0.75），與其它各組相比有顯著性差異，P<0.05，其余各組動(dòng)情周期恢復(fù)率無(wú)顯著性差異。移植1月時(shí)，結(jié)果顯示，干預(yù)組存活卵泡總數(shù)明顯高于非干預(yù)組；HMG0.15-CTG高于其它干預(yù)組和新鮮移植組，P<0.0

9、5，HMG0.60-CTG（6.91±2.51）的卵泡總數(shù)明顯低于HMG0.15-CTG（9.36±3.02）和FTG（8.04±2.85），P<0.05。 結(jié)論：①卵巢移植部位血管密度的大小將影響促性腺激素對(duì)移植后血供重建的效果；②移植前的HMG體外短暫干預(yù)及移植時(shí)對(duì)移植部位的實(shí)時(shí)干預(yù)可縮短移植卵巢與移植部位血供重建的時(shí)間。③卵巢VEGF的表達(dá)隨體外HMG干預(yù)濃度的增大而增高，移植部位早期血漿滲出量也隨濃度的增大而增多；④HM