骨髓移植修復(fù)放療損傷小鼠卵巢的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著對(duì)腫瘤放療領(lǐng)域研究的不斷深入，腫瘤患者預(yù)后明顯改善，患者生存率明顯提高。據(jù)美國1995年～2005年間數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，所有診斷浸潤癌患者(無論年齡大小)5年生存率接近60％。其中年輕女性腫瘤患者5年生存率遠(yuǎn)高于60％，治療所致的醫(yī)源性損害已逐漸得到重視。如放療常見的一個(gè)并發(fā)癥卵巢毒性引起的早絕經(jīng)和不育嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和自信。近年有關(guān)放療對(duì)卵巢損害的機(jī)制以及預(yù)防卵巢受損的研究受到了腫瘤學(xué)、生殖醫(yī)學(xué)、放射防護(hù)學(xué)等學(xué)科的關(guān)注，本文就利用骨

2、髓細(xì)胞的發(fā)育潛能來修復(fù)放療損傷卵巢組織的可能性及其機(jī)制進(jìn)行了初步實(shí)驗(yàn)研究。 本研究的目的是通過觀察骨髓移植對(duì)放療引起的卵巢受損小鼠的修復(fù)效果，比較同性/異性骨髓移植對(duì)放射引起的卵巢損傷修復(fù)的差異，以及推測(cè)其損傷修復(fù)機(jī)制。觀察的指標(biāo)包括：血清中FSH、E2含量，卵巢系數(shù)(OI)，卵巢組織的組織形態(tài)及是否出現(xiàn)動(dòng)情周期。 本論文分為三個(gè)部分。第一部分為研究骨髓移植是否對(duì)放療引起的小鼠卵巢損傷有恢復(fù)作用；第二部分為比較同性或異性

3、骨髓移植對(duì)放療引起的小鼠卵巢損傷的修復(fù)是否有差異；第三部分為關(guān)于放療損傷卵巢組織功能恢復(fù)機(jī)制的研究。各部分的實(shí)驗(yàn)方法如下： 1.骨髓移植對(duì)放療引起的小鼠卵巢損傷修復(fù)作用的實(shí)驗(yàn)中，我們采用140只SPF級(jí)8～10周齡雌性昆明小鼠，除20只作為骨髓移植供體，其余120只隨機(jī)分為平均三組：正常對(duì)照組，單次放療組，骨髓移植組。正常對(duì)照組，不采取任何措施；單次放療組，單次放療后不采取任何措施；骨髓移植組，單次放療后24h進(jìn)行骨髓移植。骨髓

4、移植后于第1，5，15，30天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別從各組中取10只小鼠檢測(cè)血清中E2，F(xiàn)SH水平并測(cè)定OI，取卵巢組織做病理切變觀察；采用析因方差方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 2.同性或異性骨髓移植對(duì)放療引起的小鼠卵巢損傷的修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，我們采用175只SPF級(jí)8～10周齡雌性昆明小鼠，15只SPF級(jí)8～10周齡雄性昆明小鼠。其中15只雄性小鼠作為雄性骨髓移植供體，15只雌性小鼠作為雌性骨髓移植供體。余下160只雌性小鼠隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組，單次

5、放療組，同性骨髓移植組，異性骨髓移植組。正常對(duì)照組，不采取任何措施；單次放療組，單次放療后不采取任何措施；異性骨髓移植組，單次放療后24h內(nèi)移植雄性小鼠骨髓細(xì)胞；同性骨髓移植組，單次放療后24h內(nèi)移植雌性小鼠骨髓細(xì)胞。于骨髓移植后第1，5，15，30天每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別從各組中取10只小鼠檢測(cè)血清中E2，F(xiàn)SH水平，并測(cè)定OI，并取卵巢組織做病理切變觀察；采用析因方差方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 3.骨髓細(xì)胞移植到放療后小鼠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，我們采用

6、了22只雌性ICR小鼠，其中10只作為熒光骨髓移植受體，6只作為單次放療組，6只作為空白對(duì)照組。另有5只帶有綠色熒光標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因ICR小鼠作為骨髓移植供體。單次放療組單次放療后不采取任何措施；空白對(duì)照組，不采取任何措施；骨髓移植組，單次放療后24h移植熒光小鼠骨髓細(xì)胞。骨髓移植后的第15，30天分別取對(duì)照組3只，單次放療組3只，熒光骨髓移植組5只小鼠的卵巢組織做冰凍切變觀察是否出現(xiàn)帶有熒光標(biāo)記的卵細(xì)胞。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

7、1.放射后放療后骨髓移植組(E2：10.83ng/L，F(xiàn)SH：2.94IU/L，OI：2.16)，單次放療組(E210.30ng/L，F(xiàn)SH2.84IU/L，OI：2.24)的激素水平、卵巢系數(shù)與正常組(E210.83ng/L，F(xiàn)SH2.42IU/L，OI：2.70)差異顯著，在放療后第15、30天，單次放療組成熟卵泡數(shù)量減少，卵巢血管增生，有纖維化；骨髓移植組可見原始卵泡，初級(jí)卵泡，次級(jí)卵泡，成熟卵泡，血管較豐富。血清中E2、FSH水

8、平及OI在放療后第15、30天骨髓移植組(E223.02ng/L，F(xiàn)SH2.59IU/L，OI：2.60；E223.92ng/L，F(xiàn)SH2.24IU/L，OI：2.76)與單次放療組(E218.17ng/L，F(xiàn)SH2.98IU/L，OI：2.34；E219.62ng/L，F(xiàn)SH3.05IU/L，OI：2.47)有顯著性差異。(血清中E2、FSH水平及卵巢系數(shù)在第15天時(shí)的F值分別為15.676，2.854，27.215；P值分別為0.0

9、00，0.000，0.045；第30天時(shí)的F值分別為12.610，15.657，19.709；P值分別為0.000，0.000，0.000)。 2.放療后初期同性骨髓移植組、異性骨髓移植組、單次放療組的E2，F(xiàn)SH，OI分別為(12.12ng/L，3.59IU/L，2.23；12.10ng/L，3.56IU/L，2.27；10.38ng/L，3.29IU/L，2.22)，與正常對(duì)照組(25.35ng/L，2.36IU/L，2.8

10、3)差異顯著；在骨髓移植第15、30天，單次放療組、異性骨髓移植組成熟卵泡數(shù)量持續(xù)減少，卵巢血管增生，有纖維化，較實(shí)驗(yàn)初期未見明顯好轉(zhuǎn)；同性骨髓移植組可見原始卵泡，初級(jí)卵泡，次級(jí)卵泡，成熟卵泡，血管較豐富。在第15天同性骨髓移植組(E218.38ng/L，F(xiàn)SH3.10IU/L，OI：2.59)血清中E2、FSH水平及OI與單次放療組(E210.83ng/L，F(xiàn)SH2.42IU/L，OI：2.70)、異性移植組(E212.54ng/L，

11、FSH3.88IU/L，OI：2.46)有顯著性差異，與正常對(duì)照組(E225.39ng/L，F(xiàn)SH2.39IU/L，OI：2.82)接近，并可以繼續(xù)好轉(zhuǎn)至30日。(血清中E2、FSH水平及OI在第15天時(shí)的F值分別為124.038、95.431、15.346；P值分別為0.000、0.000、0.000；在第30天時(shí)的F值分別為180.967、190.495、10.968；P值分別為0.000、0.000、0.000)3.骨髓移植后第1