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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:胸腺上皮性腫瘤是前上縱膈最常見的原發(fā)腫瘤,起源于胸腺上皮細(xì)胞或向胸腺上皮分化的干細(xì)胞。2004年,WHO根據(jù)胸腺瘤的上皮細(xì)胞形態(tài)、排列方式以及淋巴細(xì)胞在腫瘤組織中的比例,將胸腺瘤劃分為A、AB、B1、B2和B3五種常見亞型,以及其他少見特殊類型。胸腺瘤的ICD-O行為編碼為1,多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),雖然A、AB和B1型胸腺瘤基本上屬于良性腫瘤,預(yù)后較好,但少數(shù)也可復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移;而B2和B3型胸腺瘤雖具有較高的侵襲性,預(yù)后相對(duì)較差,但也有少數(shù)
2、病例呈良性經(jīng)過。故探討反映該類腫瘤生物學(xué)行為的標(biāo)記物,對(duì)于腫瘤術(shù)后的治療具有重要的指導(dǎo)性意義。
腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因2(MetastasisTumorAntigen2,MTA2)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)腫瘤候選基因——MTA(MTA1,MTA2,MTA3)家族的成員之一。MTA2蛋白是具有核小體重塑活性的組蛋白去乙?;?nueleosomeremodelingdeacetylase,NuRD)的亞基。研究發(fā)現(xiàn),MTA2與人類一些腫瘤
3、如卵巢癌、乳腺癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌等的侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,是反映腫瘤生物學(xué)行為的很好的標(biāo)記物。
MTA2是轉(zhuǎn)錄抑制因子Kaiso的下游靶基因,而P120連環(huán)蛋白(P120catenin,P120ctn)又可調(diào)節(jié)Kaiso的核漿分布和功能,但三者在胸腺瘤中的表達(dá)及關(guān)系是否能夠反映胸腺瘤的生物學(xué)行為尚不清楚。本研究旨在探討胸腺瘤中P120ctn、Kaiso和MTA2的表達(dá)情況及其與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系,并探討這種表達(dá)及關(guān)系反映
4、胸腺瘤的生物學(xué)行為的可能性。
材料與方法:
1、材料
標(biāo)本來源于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2007年12月~2011年8月經(jīng)外科手術(shù)切除的胸腺瘤組織137例,其中男性59例,女性78例;年齡19~75歲,平均年齡51歲。腫瘤平均直徑為5cm(1~15cm),伴有重癥肌無力癥狀的6l例,不伴有重癥肌無力癥狀的76例。標(biāo)本由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師根據(jù)2004年WHO胸腺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)診斷:其中A型胸
5、腺瘤11例,AB型胸腺瘤50例,B1型胸腺瘤22例,B2型胸腺瘤37例,B3型胸腺瘤17例。按照Masaoka的胸腺瘤臨床分期:Ⅰ期胸腺瘤53例,Ⅱ期胸腺瘤31例,Ⅲ期胸腺瘤46例,Ⅳ期胸腺瘤7例。另外選取胸腺癌3例,胸腺瘤旁正常胸腺組織18例作為對(duì)照,患者術(shù)前均未接受過放化療。
2、免疫細(xì)胞化學(xué)染色
將標(biāo)本制成4μm連續(xù)切片,經(jīng)脫蠟、脫苯、水化后,采用鏈霉菌抗生物素蛋白—過氧化酶免疫組化法(S-P法)進(jìn)行染
6、色。鼠抗人p120ctn單克隆抗體(1:200,catalognumber:610134購(gòu)自美國(guó)BDTransductionLaboratories公司)和鼠抗人Kaiso單克隆抗體(1:200,購(gòu)自美國(guó)Millipore公司),兔抗人MTA2多克隆抗體(1:800ab8106購(gòu)自英國(guó)abeam公司香港分公司)。一抗4℃孵育過夜。以本實(shí)驗(yàn)室已有的強(qiáng)表達(dá)的肺癌組織為陽(yáng)性對(duì)照,以PBS緩沖液代替一抗為空白對(duì)照。SP染色超敏試劑盒(KIT-9
7、710)、DAB顯色劑(DAB0031)購(gòu)自福州邁新公司。
3、結(jié)果判定
采用半定量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行染色強(qiáng)度評(píng)分:無著色為0分,淡黃色顆粒為1分,棕黃色顆粒為2分,黃褐色顆粒為3分:陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分:每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野,每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)胸腺上皮腫瘤細(xì)胞。陽(yáng)性細(xì)胞≤10%為0分,11%~25%為1分,26%~75%為2分≥76%為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比的評(píng)分與染色強(qiáng)度的評(píng)分相乘得到最終的評(píng)分。對(duì)
8、于Kaiso,當(dāng)最終評(píng)分≤1定義為陰性表達(dá),≥2為陽(yáng)性表達(dá);P120ctn正常表達(dá)的陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞膜,當(dāng)腫瘤細(xì)胞胞漿陽(yáng)性表達(dá),且最終評(píng)分≥2時(shí)定義為異位漿表達(dá)陽(yáng)性:MTA2主要在細(xì)胞核中表達(dá),胞漿同時(shí)略有表達(dá),將最終評(píng)分≥2分定義為MTA2陽(yáng)性表達(dá)。最終評(píng)分3-5分定義為中等陽(yáng)性表達(dá),最終評(píng)分≥6分定義為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。
4、統(tǒng)計(jì)分析
各組資料應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
9、
結(jié)果:
正常胸腺上皮細(xì)胞中P120ctn為細(xì)胞膜連續(xù)表達(dá),kaiso和MTA2為陰性表達(dá)。P120ctn在胸腺瘤細(xì)胞中出現(xiàn)膜表達(dá)減弱和胞漿異位表達(dá),胞漿異位表達(dá)率為76.6%(105/137)。Kaiso主要在胸腺瘤細(xì)胞漿中表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)率為69.3%(95/137)。MTA2主要表達(dá)于胸腺瘤細(xì)胞核,陽(yáng)性表達(dá)率為70.8%(97/137)。胸腺瘤細(xì)胞中P120ctn異位漿表達(dá)、Kaiso漿表達(dá)及MTA2的核
10、表達(dá)兩兩間存在有較好的一致性(Kappa=0.559,P<0.001;Kappa=0.512,P<0.001;Kappa=0.652,P<0.001)和相關(guān)性(r=0.733,P<0.001;r=0.652,P<0.001;r=0.708,P<0.001),并與組織學(xué)分型及臨床分期相關(guān)(P<0.05)。High-risk(B2、B3型)胸腺瘤組的P120ctn、Kaiso胞漿表達(dá)及MTA2胞核表達(dá)均高于low-risk(A、AB和B1型
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