金福安湯通過調控P120ctn及其轉錄因子Kaiso干預肺癌轉移機制的研究.pdf

1、目的:
　　課題組前期的實驗研究發(fā)現，金福安湯不僅下調Lewis小鼠肺癌組織p120ctn的異位表達，還降低A549細胞p120ctn磷酸化程度，而p120ctn又是Kaiso重要的和肺癌轉移密切相關的結合蛋白，推測金福安湯可能是通過調控p120ctn及其轉錄因子Kaiso的表達而干預肺癌轉移的。本研究擬通過體外實驗觀察金福安湯對肺癌各種細胞系的增殖、遷移和侵襲能力的影響，探究p120ctn各亞型、其相關轉錄因子Kaiso和p12

2、0ctn絲氨酸288位點的磷酸化的表達，以探究金福安湯是通過連環(huán)蛋白p120ctn的哪些亞型發(fā)揮作用，和其如何調控轉錄因子Kaiso發(fā)揮抗腫瘤轉移的作用，以及其如何通過影響p120ctn絲氨酸288位點的磷酸化狀態(tài)來干預肺癌轉移的機制，為揭示中藥復方干預肺癌轉移機制的研究提供了理論支持和實驗依據。
　　方法:
　　將人肺腺癌細胞株H1299、H1650和A549細胞以及人肺鱗癌細胞株H520進行細胞培養(yǎng)傳代。運用CCK8法觀

3、察金福安湯對不同類型肺癌細胞增殖能力的抑制作用。通過體外基質膠遷移和侵襲實驗(transwell)檢測金福安湯對各種類型肺癌細胞遷移和侵襲能力的影響。運用免疫熒光、Western-Blot方法探討金福安湯對不同肺癌細胞中p120ctn、p120ctn亞型1A(p120ctn1A)、p120ctn亞型3A(p120ctn3A)和相關轉錄因子Kaiso的表達以及p120ctn絲氨酸288位點的磷酸化的影響。
　　結果:
　　1.

4、金福安湯對人肺腺癌細胞株H1299、H1650和A549細胞以及人肺鱗癌細胞株H520有增殖抑制作用，且不僅具有一定的時間依賴性還具有一定的濃度依賴性（p＜0.05），順鉑組也能顯著抑制各肺癌細胞的增殖能力，其和空白對照組相比均具有顯著的統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　2.體外基質膠遷移和侵襲實驗中，中藥金福安湯低、中、高劑量組可發(fā)現不同類型肺癌細胞株中遷移和穿透小室底部的細胞數目均在下降，且遷移和侵襲能力的抑制作用隨著濃度的增

5、加逐漸增強(p＜0.05)，順鉑也可抑制肺癌細胞遷移和侵襲，與空白對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　3.免疫熒光結果發(fā)現，空白對照組中的人肺鱗癌細胞H520和人肺腺癌細胞H1650中的連環(huán)蛋白p120ctn在細胞漿和細胞膜上均呈現明亮的綠色熒光，呈現強表達，而在細胞核的綠色熒光較弱，而肺腺癌H1299細胞中空白對照組中的p120ctn蛋白表達主要定位于胞漿和胞核，細胞膜幾乎不表達，并且胞漿和胞核的熒光強度較弱。

6、我們還觀察到在空白對照組中肺腺癌H1299、H650細胞及鱗癌細胞H520中Kaiso的表達，發(fā)現H1299中Kaiso主要表達于細胞核內，弱表達于細胞質，卻還發(fā)現Kaiso在H520和H1650中的表達很弱，而且主要表達于細胞質。但中藥組處理后的肺癌不同類型細胞系H1299和H520中連環(huán)蛋白p120ctn和Kaiso的表達較空白對照組明減少，且差異具有統(tǒng)計學意義（p＜0.05），而在H1650中連環(huán)蛋白p120ctn的表達下調，但K

7、aiso的表達水平是增加的。
　　4.Western-Blot結果發(fā)現金福安湯可下調肺癌細胞系H1299、A549、H1650和H520中的連環(huán)蛋白p120ctn和其p120ctn亞型1A(p120ctn1A)的表達，減弱其相關轉錄因子Kaiso的表達，而處理后的H1650細胞中Kaiso的表達水平卻增高。同時還發(fā)現金福安湯可減弱連環(huán)蛋白p120ctn絲氨酸288位點的磷酸化的程度。
　　結論:
　　1.在體外實驗研究

8、中，我們發(fā)現金福安湯可顯著抑制人肺腺癌細胞株H1299、H1650和A549細胞以及人肺鱗癌細胞株H520的生長和增殖能力，具有一定的時間依賴性和濃度依賴性，還發(fā)現金福安湯可顯著抑制肺癌細胞遷移和侵襲能力。
　　2.金福安湯可能通過介導與肺癌侵襲和轉移密切相關的連環(huán)蛋白p120ctn及p120ctn1A的表達來調控其相關轉錄因子Kaiso的表達水平來降低肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力從而干預肺癌的轉移。
　　3.我們還發(fā)現金