MiR-122在慢性丙型肝炎發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、第一部分，miR-122對IFN-α抗HCV效應(yīng)的影響
　　 目的：探討miR-122對α-干擾素(IFN-α)抗丙型肝炎病毒(HCV)效應(yīng)的影響。
　　 方法：
　　 1.給感染HCV的Huh7.5.1予miR-122模擬物(20nmol/L、100nmol/L、400nmol/L)和(或)IFN-α(1000IU/ml)處理，采用熒光定量PCR檢測HCVRNA水平。
　　 2.給Huh7.5.1細胞感

2、染不同數(shù)量HCV(107拷貝，106拷貝，105拷貝)和(或)IFN-α處理，熒光定量PCR檢測HCVRNA水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.IFN-α以時間依賴方式抑制HCV復(fù)制，在48h時使HCVRNA下降了83％。miR-122模擬物呈劑量依賴性促進HCVRNA復(fù)制(P<0.05)。
　　 2.IFN-α的抗病毒效應(yīng)與miR-122模擬物水平(20nmol/L、100nmol/L、400nmol/L)成反比，

3、與對照組比較有顯著性差異(73.3％±3.5％，64.67％±5.5％，56.33%±5.1％vs84％±4.5％，P<0.05或P<0.01)。
　　 3.IFN-α的抗病毒效應(yīng)與HCV載量呈反比(105拷貝組vs107拷貝組，P<0.05)。
　　 結(jié)論：在細胞感染模型中，miR-122促進HCV的復(fù)制，并且，miR-122可能通過影響HCV載量而間接影響IFN-α的抗病毒效應(yīng)。
　　 第二部分，HCV核心蛋

4、白對miR-122表達的影響
　　 目的：利用HCV細胞感染模型和HCVCORE融合表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞模型，探討HCV病毒和CORE蛋白對miR-122表達水平的影響。
　　 方法：
　　 1.Huh7.5.1細胞感染2×106拷貝/mlHCV32天，熒光定量PCR檢測Huh7.5.1細胞內(nèi)HCVRNA和miR-122的表達水平。
　　 2.Huh7.5.1細胞感染不同拷貝數(shù)HCV(105拷貝，106拷貝，

5、107拷貝and108拷貝)，熒光定量PCR檢測細胞內(nèi)miR-122水平。
　　 3.Huh7.5.1細胞轉(zhuǎn)染不同數(shù)量(0.5μg，1μg，2μg)質(zhì)粒pEGFP-core(表達GFP-HCVcoreprotein融合蛋白)或陰性對照質(zhì)粒pEGFP，檢測Huh7.5.1細胞內(nèi)miR-122水平及感染HCV后各組細胞內(nèi)HCVRNA水平；或轉(zhuǎn)染同一濃度(1.5μg)的質(zhì)粒pEGFP-core或陰性對照質(zhì)粒pEGFP后，在不同時間點(

6、24h，48h，72h)檢測Huh7.5.1細胞內(nèi)miR-122水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.在感染初期，隨著HCV載量增加，miR-122水平輕微上升；在感染第19天，HCV載量繼續(xù)增加，而miR-122水平開始急劇下降，在第32天時降至原來水平的50％。
　　 2.與未感染HCV的control組相比，105組中miR-122水平升高，108組中miR-122水平明顯下降，降至對照組的67％(P<0.05)