聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸治療胰腺癌和MRI動(dòng)態(tài)觀測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、Y 9 5 7 3 7 3研式博士學(xué)位論文( 2 0 0 6 屆)聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核菩酸治療胰腺癌和M R I 動(dòng)態(tài)觀測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究E m p i r i c a lS t u d y o f C o t r a n s f e c t i n gA n t i s e n s e O l i g o n u c l e o t i d ef o r T r e a t i n gH u m a n P a n c r e a t i cC

2、 a n c e r a n dO b s e r v i n g w i t hM R J D y n a m i c a l l y研究生姓名 塹墮盎指導(dǎo)教師姓名 塞疊量( 鏨撞)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng) 囪盟鱟研究方向 監(jiān)擅瘞癌盆主受堡堂淪文提交日劃 ：2 Q Q 魚(yú)生生旦聯(lián)臺(tái)轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸治療胰腺痛和M R I 動(dòng)態(tài)觀測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究 中文摘蟹同時(shí)證明P C R ．S S P 法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。二、聯(lián)合應(yīng)用K - r a s 和1 6 F -

3、IR 反義寡核苷酸對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān) a t u 8 9 8 8調(diào)節(jié)作用的影響1 ．目的：采用針對(duì)K —r a S 點(diǎn)突變的反義寡核苷酸和I G F 一1R 反義寡核菅酸聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān) a t u 8 9 8 8 進(jìn)行了體外治療試驗(yàn)，對(duì)聯(lián)合應(yīng)用反義寡核苷酸的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。2 ．材料和方法：根據(jù)P a t u8 9 8 8 細(xì)胞株K —r a s 第1 2 密碼子點(diǎn)突變形式G T T ，設(shè)計(jì)出與之互補(bǔ)反義寡

4、核苷酸( K ．r a s ．m u t ) ，同時(shí)根據(jù)K - r a s e D N A 帽區(qū)序列設(shè)計(jì)與K —r a s 基因帽區(qū)反義寡核苷酸( K —r a s —c a p ) 。I G F ．IR 的反義寡核苷酸序列選用經(jīng)較多科研單位證實(shí)效果較好的序列( I G F —I R ) 。采用M T T 法確定反義寡核苷酸的最佳有效劑量、篩選K - r a s —m u t 和K —r a s ·c a p 中抑制效果優(yōu)者，

5、并選擇反義寡核苷酸作用最佳時(shí)間點(diǎn)。通過(guò)倒置相差顯微鏡和細(xì)胞集落試驗(yàn)進(jìn)一步觀察反義寡核苷酸對(duì)細(xì)胞抑制的效果。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)K ．r a s 蛋白和I G F ．IR 蛋白表達(dá)率以及細(xì)胞凋亡率，R T - P C R檢測(cè)K ．r a s 和I G F —IR m R N A 表達(dá)。并采用電鏡觀察用藥后的細(xì)胞器微觀變化。3 ．結(jié)果：M T T 檢測(cè)結(jié)果表明采用1 6 u g ／m l 的藥物濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生較好的抑制作用，K ．r a

6、s ．m u t A S O D N 抑制效果優(yōu)于K —r a s - c a p A S O D N ，藥物抑制作用最佳時(shí)間點(diǎn)為4 8 h 。倒置相差顯微鏡觀察和細(xì)胞集落試驗(yàn)都證實(shí)聯(lián)合用藥對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯抑制作用。蛋白和m R N A 檢測(cè)結(jié)果證實(shí)反義寡核苷酸均可以抑制其相應(yīng)的蛋白和m R N A 表達(dá)，聯(lián)合用藥組的凋亡率最高。電鏡從微觀影像角度證實(shí)聯(lián)合用藥導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。4 ．結(jié)論：聯(lián)合應(yīng)用反義寡核苷酸可以對(duì)體外培養(yǎng)的胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生