VEGF反義寡核苷酸治療前列腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)反義寡核苷酸(AS一00N)對(duì)前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C一3VEGF表達(dá)及生長(zhǎng)增殖的影響。同時(shí)建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型，進(jìn)行體內(nèi)治療，觀察腫瘤生長(zhǎng)情況，檢測(cè)VEGF表達(dá)，微血管密度及腫瘤細(xì)胞凋亡，探討前列腺癌治療的新策略。 方法：L體外實(shí)驗(yàn)：不同濃度的正義，反義寡核苷酸經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C一3中，流式細(xì)胞儀檢測(cè)VEGF表達(dá)，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖。2．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：建立荷瘤裸鼠模型后，荷瘤裸鼠

2、瘤體內(nèi)分別注射不同劑量濃度的VEGF反義寡核苷酸，正義寡核苷酸和生理鹽水．定期觀察瘤體大小的變化。免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)瘤體內(nèi)VEGF表達(dá)及微血管密度的差異，以及原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)測(cè)定腫瘤細(xì)胞細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：濃度組5，10，20μmol幾反義寡核苷酸經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染PC一3細(xì)胞后，細(xì)胞VEGF表達(dá)量為0．102±O．008，0．136±0．003和0．037±O．006：細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為18．55％，30．06

3、％和38．99％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，細(xì)胞VEGF表達(dá)及增殖均存在濃度依賴性。反義組VEGF表達(dá)及增殖抑制情況與正義組及對(duì)照組間均存在顯著性差異(P<0．05)。應(yīng)用VEGF反義寡核苷酸，正義寡核苷酸和生理鹽水分別對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行30天治療后發(fā)現(xiàn)，反義組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)遲緩，瘤體重量(0．199±O．094g)較正義組和對(duì)照組減輕，；腫瘤免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，反義寡核苷酸明顯下調(diào)了VEGF蛋白(35．05±3．32)％及微血管密度(11．10±1．