復(fù)發(fā)的視神經(jīng)脊髓炎患者外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá).pdf

1、目的 1.探討視神經(jīng)脊髓炎(Neuromyelitis optica，NMO)患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood monocaryon cell，PBMC) Bcl-2基因的表達(dá)水平與此疾病復(fù)發(fā)之間的相關(guān)性； 2.進一步探討視神經(jīng)脊髓炎患者復(fù)發(fā)的時限與患者外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)水平之間的相關(guān)性。 方法 1.選擇確診的視神經(jīng)脊髓炎患者25例，分為復(fù)發(fā)組及未復(fù)發(fā)組。其中復(fù)發(fā)組1

2、4例，未復(fù)發(fā)組11例。 2.分別取復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的新鮮外周靜脈血5ml，應(yīng)用Ficoll密度-梯度離心法分離其外周血單個核細(xì)胞。 3.以分離后的外周血單個核細(xì)胞為材料，應(yīng)用TRIzol法提取細(xì)胞內(nèi)的mRNA。 4.以提取的mRNA為模板，應(yīng)用兩步法反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-PCR，RT-PCR)技術(shù)，首先將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，繼而以cDNA為模板，以Bcl-2為目

3、的基因及GAPDH為內(nèi)參對照，分別經(jīng)其引物擴增。 5.擴增后產(chǎn)物經(jīng)嗅化乙啶(Ethidium bromide，EB)染色，1％瓊脂糖凝膠電泳后觀察，應(yīng)用凝膠成像分析儀攝片。 6.以同一樣本Bcl-2基因與GAPDH基因的灰度比作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)，主要應(yīng)用QUANTITY ONE軟件處理試驗圖片得出數(shù)據(jù)，經(jīng)GENE TOOLS軟件驗證性處理圖片得出數(shù)據(jù)，并選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法，應(yīng)用SPSS軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。

4、結(jié)果 1.復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者的一般資料比較，其年齡差異(t=0.216，P>0.05)、性別差異(x2=0.365，P>0.05)、發(fā)病次數(shù)差異(t=0.275，P>0.05)均無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)水平之間的差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.096，P<0.001)。 3.復(fù)發(fā)組患者依據(jù)發(fā)病時間分為<2天、2-4天、4-6天、>6天組別，各組間患者外周血單個核細(xì)

5、胞Bcl-2基因表達(dá)水平之間的差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=70.880，P<0.001)。 4.各組間比較，復(fù)發(fā)后發(fā)病小于2天的患者與發(fā)病大于等于2天(包括2-4天組、4-6天組及≥6天組)的患者Bcl-2基因表達(dá)水平之間的差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.001)。2-4天組與4-6天組相比，尚不能認(rèn)為其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.819，P>0.05)；但與>6天組相比則差距有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.085，P<0.01)。4-

6、6天組與>6天組的Bcl-2/GAPDH灰度比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.766，P>0.05)。 5.分別應(yīng)用QUANTITY ONE及GENE TOOLS軟件處理試驗圖片。處理后所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件進行分析后得到相同的統(tǒng)計學(xué)結(jié)果。以上所有結(jié)果以QUANTITY ONE軟件處理的數(shù)據(jù)為例進行說明。 結(jié)論 1.視神經(jīng)脊髓炎患者復(fù)發(fā)時可檢測到外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因較未復(fù)發(fā)患者表達(dá)增強，可以認(rèn)為視神經(jīng)脊髓炎的