豬RGS2和Gaq-11基因的克隆、定位及其生物特性研究.pdf

1、脂肪細胞是由中胚層的間充質干細胞（MSC）分化而來，MSC主要分布于脂肪組織和骨髓中，能分化為脂肪細胞、造骨細胞和軟骨細胞。目前脂肪細胞分化的中晚期調控機理相對較清楚，但脂肪細胞分化早期調控的分子機理十分復雜，且報道甚少。 G蛋白信號轉導調節(jié)子2（RGS2）是動物機體中神經、激素及外界信號刺激轉導的重要信號分子，它作為G蛋白分子開關，在廣泛地協(xié)調胞外刺激應答中起著重要的作用。最近的研究表明，RGS2是脂肪細胞早期分化的重要調控因

2、子；在對小鼠皮下前脂肪細胞分化研究時發(fā)現，在所有G蛋白alpha亞基中只有Gaq／11的表達量顯著減少，提示可能Gaq／11在前脂肪細胞分化中起重要作用。RGS2直接參與Gaq的作用，因此兩者的協(xié)同作用可能與脂肪細胞早期分化調控有關。 本研究在已知人RGS2、Gaq／11基因序列的基礎上，采用電子克隆和同源序列法相結合的方法，克隆了豬RGS2、Gaq／11 cDNA（GenBank No：DQ150111，DQ319976、DQ

3、256410）。參考人和鼠RGS2基因序列，在已獲得的cDNA序列上設計引物，擴增內含子，獲得RGS2基因組序列（GenBank No：DQ2856600）。序列分析發(fā)現這三個基因編碼區(qū)在人、豬之間的同源性很高94-100％，特別是Gaq，在人、獼猴、小鼠、大鼠、南美負鼠和豬上的氨基酸序列完全相同；RGS2基因結構與人、鼠相同，且內含子兩端都符合GT／AG規(guī)則。 采用豬輻射雜種板技術，對三個基因進行了染色體精細定位，分別定位在豬

4、10p、1q21-27和2q21-24。三個基因所在的豬染色體區(qū)域與基因在人相應的染色體位置相一致。 用半定量PCR的方法，對三個基因進行了組織表達譜分析。三個基因在組織中的表達范圍都很廣泛。RGS2基因在豬的肌肉、肝、心、脾、肺、脂肪組織、腦、子宮組織中均有表達，在腎、胃和腸中沒有檢測到表達，其中在脂肪、肌肉和心等組織中表達量較高，在脾、肺等組織中表達量較低。Gaq和Gall基因的表達在時空上基本一致，除在腎、肺、胃、腸組織中