LOH12CR1與THRSP相互作用的鑒定.pdf

1、前言:LOH12CR1是抑瘤蛋白LKB1的互作蛋白，其具體作用機制尚不明確。THRSP/Spot14是2011年本課題組初步篩選出LOH12CR1的互作蛋白，人Spot14蛋白主要在脂肪生成組織中表達，被認(rèn)為是脂肪生成必須的蛋白，且在乳腺癌中經(jīng)常是高量表達。
　　目的:驗證LOH12CR1與THRSP是否存在真正的蛋白質(zhì)互作關(guān)系，為LOH12CR1的功能研究提供新的方向。
　　方法:本研究將構(gòu)建的pcDNATM3.1/myc

2、-His-LOH12CR和pCMV-tag2B-THRSP重組質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染HEK293細胞，通過免疫共沉淀技術(shù)驗證二者在細胞內(nèi)的相互作用，通過激光共聚焦技術(shù)觀察二者在HEK293細胞內(nèi)的免疫熒光亞細胞水平共定位情況。
　　結(jié)果:1、經(jīng)免疫共沉淀正反雙向?qū)嶒炞C實了實驗所構(gòu)建的載體正確，在細胞內(nèi)均有表達，分子量大小合適，從而證實了THRSP與LOH12CR1在細胞內(nèi)存在相互作用;
　　2、經(jīng)免疫熒光實驗及激光共聚焦檢測到THRS

3、P主要定位于胞漿中，而LOH12CR1在胞漿、胞核中均有分布，LOH12CR1與THRSP存在亞細胞共定位，且主要共定位于胞漿。
　　結(jié)論:本研究證實了THRSP/Spot14與LOH12CR1在細胞內(nèi)存在相互作用的關(guān)系，目前已知THRSP/Spot14主要生物學(xué)功能為脂肪合成所必需的蛋白且在某些腫瘤（特別是乳腺癌）中有高表達，從而提示了LOH12CR1可能從脂代謝方面參與了肥胖和腫瘤（特別是乳腺癌）的發(fā)生發(fā)展，這些假設(shè)我們將在后