實驗性視神經(jīng)炎小鼠模型的建立及NFG對其保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 1、建立以髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG35-55)多肽誘發(fā)的實驗性視神經(jīng)炎小鼠模型。
　　 2、通過動態(tài)監(jiān)測閃光視覺誘發(fā)電位(f-VEP)和閃光視網(wǎng)膜電圖(f-ERG)并結(jié)合病理學(xué)方法研究小鼠實驗性視神經(jīng)炎發(fā)病過程中視覺功能的變化
　　 3、研究NGF對實驗性視神經(jīng)炎小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的保護(hù)作用
　　 方法：
　　 1、應(yīng)用MOG35-55多肽加完全弗氏佐劑皮下注射免疫C57BL/

2、6小鼠(50只)建立實驗性視神經(jīng)炎模型，CON組和EAE組小鼠于免疫后的不同時間點進(jìn)行f-VEP和f-ERG檢查，初步應(yīng)用f-VEP的改變來診斷視神經(jīng)炎。
　　 2、EAE組小鼠和CON組小鼠于p.i.7d、p.i.14d、p.i.20d、p.i.30d對視神經(jīng)采用HE染色、Luxol fast blue染色、Bielschowsky銀染分別評估炎性細(xì)胞浸潤、髓鞘脫失、軸突病理改變；并在電鏡下觀察視神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的變化.使用TUN

3、EL法檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡并計算其凋亡指數(shù)。
　　 3、40只小鼠隨機(jī)分為BSS+EAE組和NGF+EAE組.NGF+EAE組給予玻璃體注射NGF，BSS+EAE組玻璃體注射BSS液，于p.i.7d、p.i.14d時對兩組小鼠進(jìn)行f-VEP和f-ERG檢查；采用HE染色、Luxol fast blue染色、Bielschowsky銀染分別評估視神經(jīng)炎性細(xì)胞浸潤、髓鞘脫失、軸突病理改變；使用TUNEL法檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡

4、并計算其凋亡指數(shù)。
　　 結(jié)果：
　　 1、本實驗應(yīng)用MOG35-55多肽加完全弗氏佐荊皮下注射免疫正常C57BL/6小鼠，以眼計算，60％眼f-VEP發(fā)生改變，視神經(jīng)炎發(fā)病率為57.5％(病理診斷)，大部分為雙眼發(fā)病，左右眼無明顯差異。
　　 2、EAE組小鼠建模前f-VEP和f-ERG與CON組比較無顯著性差異，本實驗對不同時間點的電生理改變眼的結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計：在p.i.7d，EAE組小鼠f-VEP和f-ER

5、G各波潛伏期和幅值與CON組比較差別有顯著性意義(P<0.05).在p.i.14d，EAE組小鼠f-VEP和f-ERG各波和p.i.7d比較有顯著性差異(P<0.01).在p.i.20d和p.i.30d，電生理結(jié)果與CON組比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，但并沒有恢復(fù)趨勢。
　　 3、在p.i.7d，光鏡下觀察EAE組視神經(jīng)HE染色和Bielschowsky銀染與CON組無明顯改變；Luxol fast blue染色可見髓

6、鞘排列紊亂；電鏡下可見髓鞘斷裂分層，與軸突分離；TUNEL檢測EAE小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞無明顯凋亡，在p.i.14d，視神經(jīng)呈現(xiàn)不同程度的炎性浸潤、髓鞘脫失和軸突損害；電鏡下可見不同程度的髓鞘板層狀分離、變薄、脫失，軸索水腫，線粒體明顯腫脹；TUNEL檢測EAE組已有明顯的RGCs凋亡，與CON組比較有顯著性差別(P<0.01)，在p.i.20d和p.i.30d時，光鏡下視神經(jīng)的脫髓鞘程度并沒有減輕.凋亡指數(shù)隨著病程的延長而增高。

7、>　　 4、NGF+EAB組小鼠的體重和臨床評分與BSS+EAE組比較無顯著性差異(P>0.05).在p.i.7d，NGF+EAE組f-VEP和f-ERG各波幅與BSS+EAE組相比無顯著性差異(P>0.05)；TUNEL檢測兩組均無視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡.在p.i.14d，BSS+EAE組f-ERG b波潛伏期與BSS+EAE組有顯著性差異(P<0.05)；TUNEL檢測NGF+EAE組小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡指數(shù)低于BSS+EAE組

8、，差異有顯著性意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、以MOG35-55為抗原誘發(fā)的視神經(jīng)炎模型發(fā)病率高，容易復(fù)制，病理改變接近于特發(fā)性脫髓鞘性視神經(jīng)炎，是研究IDON的理想模型.病理檢查發(fā)現(xiàn)視神經(jīng)脫髓鞘的同時伴有RGCs凋亡和軸突的損傷。
　　 2、f-VEP可用來篩選和初步診斷實驗性視神經(jīng)炎和評估病情的嚴(yán)重性；可作為研究視神經(jīng)炎藥物療效的評價指標(biāo)。
　　 3，本研究提示NGF對視神經(jīng)炎小鼠視網(wǎng)