載脂蛋白AI模擬肽D4F對(duì)小鼠肝臟脂肪樣變和炎性的抑制作用.pdf

1、目的
　　本實(shí)驗(yàn)通過高脂飼料喂養(yǎng)建立與人類非酒精性脂肪性肝病(NALFD)發(fā)病過程相似的載脂蛋白E基因敲除（Apo E-/-）小鼠模型，觀察載脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)模擬肽D4F對(duì)小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響，探討Apo AⅠ模擬肽D4F對(duì)小鼠肝臟脂肪樣變及炎性的干預(yù)作用并進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制，為臨床上對(duì)NALFD的藥物治療提供依據(jù)。
　　方法
　　24只8周齡雄性Apo E-/-小鼠，經(jīng)過兩周高脂(15.8％)與高

2、膽固醇(1.25％)喂食后隨機(jī)分為3組(n=8)，分別腹腔注射生理鹽水（模型組）、紊亂模擬肽sD4F(1mg/kg·d，sD4F組)和ApoAⅠ模擬肽D4F（1 mg/kg·d，D4F組）。同周齡雄性C57BL/6J小鼠喂食普通飲食并給予腹腔注射生理鹽水作為正常對(duì)照組。6周后處死，ELISA法檢測(cè)Apo E-/-及普通小鼠血漿中炎癥因子TNF-α、IL-6的含量，并取小鼠肝臟組織，采用HE染色觀察其病理形態(tài)的改變，同樣采用油紅O染色方法

3、評(píng)估肝組織脂肪變性程度，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Apo E-/-及普通小鼠肝組織核因子-κB、TNF-α在肝臟中的表達(dá)與分布，同時(shí)采用Western Blotting方法檢測(cè)肝組織中NF-κB、TNF-α的含量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，兩組間比較采用單因素方差檢驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果
　　1.小鼠肝臟組織病理切片結(jié)果顯示:光學(xué)顯微鏡下可見模型組及sD4

4、F組小鼠的肝臟細(xì)胞中出現(xiàn)大量的脂質(zhì)滴的累積，并伴有不同程度脂肪變性及小葉間炎性細(xì)胞的浸潤(rùn);D4F組小鼠的肝臟細(xì)胞脂肪變性程度顯著減輕，小葉間炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，與對(duì)照組小鼠相比無明顯差別。
　　2.對(duì)各組小鼠的血清細(xì)胞因子的檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組小鼠比較，模型組ApoE-/-小鼠血清TNF-α、IL-6的水平增高顯著，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與模型組小鼠相比，D4F組血清TNF-α、IL-6的含量明顯下降，分別為模型組的

5、48.6％和63.4％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); sD4F組與模型組比較各項(xiàng)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.免疫組化結(jié)果顯示:TNF-α在正常組小鼠肝細(xì)胞胞漿內(nèi)幾乎無表達(dá)，而在模型組小鼠肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有顯著表達(dá)(P＜0.05)，與模型組相比，D4F組肝細(xì)胞胞漿內(nèi)TNF-α表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，較模型組減少42.4％; NF-κB在正常組小鼠肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有表達(dá)，在細(xì)胞核內(nèi)幾乎無表達(dá)，而在模型組小鼠肝細(xì)胞胞漿及胞核內(nèi)均顯著

6、表達(dá)(P＜0.05)，與模型組相比，D4F組肝細(xì)胞胞核內(nèi)NF-κB表達(dá)明顯減少(P＜0.05)，為模型組的45.5％; sD4F組與模型組比較各項(xiàng)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.蛋白印跡結(jié)果顯示:TNF-α在正常組小鼠肝組織內(nèi)幾乎無表達(dá)，而在模型組小鼠肝組織內(nèi)有顯著表達(dá)（P＜0.05），與模型組相比，D4F組肝組織內(nèi)TNF-α表達(dá)明顯減少(P＜0.05); NF-κB在正常組小鼠肝組織內(nèi)有少量表達(dá)，在細(xì)胞核內(nèi)幾乎無表達(dá)，而在模型組小鼠

7、肝組織內(nèi)均顯著表達(dá)(P＜0.05)，與模型組相比，D4F組肝組織內(nèi)NF-κB表達(dá)明顯減少(P＜0.05); sD4F組與模型組比較各項(xiàng)指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論
　　高脂飲食引起Apo E-/-小鼠肝臟脂質(zhì)沉積，并繼發(fā)肝臟炎性改變;Apo AⅠ模擬肽D4F能夠減少高脂飲食Apo E-/-小鼠肝臟脂質(zhì)的沉積，同時(shí)能夠減輕肝臟組織的炎性改變，說明D4F具有預(yù)防小鼠肝臟脂肪變性及炎性的作用;Apo AⅠ模擬肽D4F對(duì)小鼠肝臟脂肪