2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  心血管疾病對人類健康造成很大危害,重要的病理機制是動脈粥樣硬化,在動脈粥樣硬化的形成中,巨噬細胞扮演重要角色,而氧化低密度脂蛋白則是泡沫細胞形成的一個主要因素。CD36、SR-A1等清道夫受體與泡沫細胞的形成關(guān)系密切,巨噬細胞在CD36、SR-A1的介導(dǎo)下能夠?qū)ρ趸兔芏戎鞍祝╫x-LDL)無上限的攝取,大量脂質(zhì)積蓄在細胞內(nèi),從而形成泡沫細胞,進而誘發(fā)動脈粥樣硬化。氧化脂質(zhì)的細胞毒效應(yīng)很強,導(dǎo)致泡沫細胞凋亡、壞死,粥

2、樣斑塊構(gòu)成的脂質(zhì)核心形成。載脂蛋白 A1是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,其模擬肽L-4F和D-4F可以促使巨噬細胞中膽固醇外流,抑制血脂紊亂引起的小鼠 AS,而 D-4F是否能夠通過調(diào)控清道夫受體表達從而抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積呢?目前尚未見報道。本工作在 ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬源性泡沫細胞模型和(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激)ERS誘導(dǎo)劑 TM誘導(dǎo)的ERS模型上,研究SR-A1的表達情況,觀察 ERS抑制劑PBA是否能夠拮抗ox-LDL及 TM對

3、 SR-A1的誘導(dǎo)作用,研究ERS與泡沫細胞形成的關(guān)系和作用機制,進一步解釋 ApoA-I模擬肽 D-4F與巨噬細胞SR-A1的相互作用關(guān)系。
  方法:
  選擇 RAW264.7巨噬細胞進行體外培養(yǎng),給予ERS抑制劑PBA(20 mmol/L)處理30 min,繼續(xù)用ox-LDL(50 mg/L)干預(yù)12 h或2μmol/L毒胡蘿卜素(thapsigagin,TG)或2 mg/LTM培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)另外一組RAW264.

4、7巨噬細胞,給予TM(0.5、1和2 mg/L)處理4 h或2mg/LTM處理1、2和4 h。RAW264.7巨噬細胞用濃度為12.5、25和50 mg/L的D4F、50 mmol/L的紊亂模擬肽sD4F處理1 h或5 mmol/LPBA30 min后,再用100 mg/Lox-LDL培養(yǎng)12 h。另外培養(yǎng)巨噬細胞,給予50 mg/LsD4F或D4F處理1 h后給予2 mg/L TM處理4 h。細胞活力檢測采用MTT法,細胞內(nèi)總膽固醇含

5、量檢測采用總膽固醇檢測試劑盒;SR-A1和GRP78蛋白表達檢測變化采用免疫印跡法;SR-A1和GRP78mRNA表達檢測采用實時熒光定量PCR技術(shù);Dil-ox-LDL攝取情況檢測采用多功能酶標儀。
  結(jié)果:
  ox-LDL組和正常對照組比較,巨噬細胞內(nèi) TC含量增加顯著(P<0.01),用 PBA干預(yù)后,ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細胞內(nèi)膽固醇蓄積量降低,與ox-LDL組比較其含量降低32.0%(P<0.05)。ox-LD

6、L處理組和正常對照組比較,ox-LDL組細胞 SR-A1、GRP78蛋白水平上調(diào)顯明(P<0.01),而 PBA對 ox-LDL誘導(dǎo)的SR-A1上調(diào)抑制顯著,與 ox-LDL組比較降低48.4%(P<0.05),細胞內(nèi)GRP78蛋白表達雖然降低39.3%,但沒有統(tǒng)計學意義(P=0.057)。ox-LDL干預(yù)后SR-A1 mRNA水平顯明上調(diào),是對照組1.81倍(P<0.05);在ox-LDL誘導(dǎo)SR-A1轉(zhuǎn)錄水平方面PBA干預(yù)無明顯影響

7、,與ox-LDL處理組比較,兩組細胞內(nèi)SR-A1的mRNA表達程度無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。巨噬細胞用TM干預(yù)后SR-A1蛋白水平顯明上調(diào),呈時間和濃度依賴性,最高峰為TM處理2 h時(P<0.05);TM的不同濃度(0.5、1和2 mg/L)雖然能夠使SR-A1 mRNA水平呈上升的趨勢,但統(tǒng)計學無差異(P>0.05)。TM能夠增加巨噬細胞攝取ox-LDL,TM(2 mg/L)尤為顯著(P<0.01)。PBA+ TM處理組與 TM

8、處理組比較,ox-LDL攝取量及 SR-A1、GRP78蛋白水平均降低明顯,分別是TM組的51.3%、53.9%、60.0%(P<0.05)。在TG作用下巨噬細胞SR-A1、GRP78蛋白水平顯著上調(diào),而PBA+ TG組SR-A1、GRP78蛋白水平均降低明顯,分別是 TG處理組的47.5%、58.3%(P<0.05)。巨噬細胞用ox-LDL損傷后,再給予D-4F,巨噬細胞損傷減弱,細胞內(nèi)膽固醇積蓄量減少。ox-LDL使巨噬細胞SR-A

9、1、GRP78表達水平升高,模擬肽 D-4F明顯抑制上述變化,并呈濃度依賴性。TM處理細胞后,細胞內(nèi)SR-A1、GRP78表達量升高,但是用D-4F干預(yù)后能下降其表達量,同時能夠減少巨噬細胞攝取ox-LDL。
  結(jié)論:
  ERS在 ox-LDL誘導(dǎo) SR-A1上調(diào)中發(fā)揮重要作用,巨噬細胞吸收ox-LDL生成泡沫細胞。清道夫受體 A1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過程中受 ox-LDL刺激表達上調(diào),而Apo-AI模擬肽D-4F能夠?qū)ρ趸兔?/p>

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