鼠的小腸分泌胰島素的研究.pdf

1、目的:明確小腸內(nèi)胰島素的存在情況及其表達水平并利用小動物成像技術(shù)來證明小腸分泌胰島素。
　　方法:8周齡的雄性Wister大鼠78只，實驗前禁食24h，分別灌胃牛血清白蛋白溶液、油脂懸液、50％葡萄糖溶液各2 mL，每組分別于灌胃后在第0min、5min、10min、15min、20min、25 min時脫臼處死，按不同的時間段分為6個組，分別取大鼠的十二指腸、胰腺組織。提取各組織中的總的RNA，在反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后再用普通的

2、PCR凝膠電泳檢測胰島素mRNA的存在的情況，并實時熒光定量PCR檢測不同的時刻十二指腸和胰腺胰島素mRNA的相對的表達量。利用小動物成像來進一步證明小腸分泌胰島素。用Cy7 NHS來標記抗鼠的胰島素抗體。經(jīng)小鼠的尾靜脈注入小鼠體內(nèi)然后將小鼠放在Kodak in Vivo Imaging System進行熒光成像，激發(fā)波長720nm，發(fā)射波長790hm，軟件進行分析。利用活體動物成像系統(tǒng)觀察Cy7標記的抗小鼠的胰島素抗體在小鼠體內(nèi)的分布

3、和代謝規(guī)律。
　　結(jié)果:普通的PCR在小鼠的十二指腸中擴增出了胰島素的基因片段;胰腺與十二指腸胰島素mRNA的相對表達量有著顯著的差異（P＜0.05），胰腺胰島素分泌遠遠高于十二指腸組織。灌胃后十二指腸和胰腺分泌胰島素的表達水平呈動態(tài)表化，且胰腺分泌胰島素的表達高峰早于十二指腸。小動物成像觀察到了小腸處的熒光信號高于除胰腺的其它的組織中。
　　結(jié)論:1.本實驗證實了十二指腸組織具有分泌胰島素的功能，并且在給大鼠灌胃后十二指腸