PRRSV感染激活I(lǐng)L-10產(chǎn)生的信號通路.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起，廣泛分布于世界各養(yǎng)豬國家，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。雖然自1987年首次發(fā)現(xiàn)該病以來人們對PRRS病毒開展了廣泛的研究，并取得了一系列有意義的進(jìn)展，但在病毒的分子致病機(jī)理和免疫機(jī)制等方面，人們還知之甚少，這也是目前研制安全、高效疫苗的主要障礙。白細(xì)胞介素10(IL-10)是一種多能的

2、、在免疫調(diào)節(jié)和宿主防御反應(yīng)中具有廣泛效應(yīng)的分子，研究發(fā)現(xiàn)激活I(lǐng)L-10的表達(dá)是多種病毒建立持續(xù)感染的一種十分有效的策略。那么PRRS病毒是否也通過上調(diào)IL-10的表達(dá)逃避宿主的免疫應(yīng)答呢？為了闡明這一問題，開展了如下研究：
　　 1.PRRSV感染PAM細(xì)胞在mRNA水平和蛋白水平激活I(lǐng)L-10的表達(dá)
　　 通過real-time RT-PCR和ELISA檢測PRRSV感染PAM細(xì)胞后不同時間點IL-10的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)

3、PRRSV感染后6h在mRNA和蛋白水平即顯著上調(diào)IL-10的表達(dá)，并隨著感染時間的延長，上調(diào)倍數(shù)逐漸增高。進(jìn)一步以紫外滅活的PRRSV和不同劑量活的PRRSV分別感染PAM細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)紫外滅活的PRRSV和未滅活的PRRSV均可誘導(dǎo)IL-10的產(chǎn)生，并且PRRSV劑量越高對IL-10的上調(diào)作用越顯著，可見PRRSV誘導(dǎo)IL-10的表達(dá)存在病毒劑量依賴性。說明PRRSV編碼的蛋白參與IL-10的激活，而且IL-10的激活與PRRSV的復(fù)制

4、增殖密切相關(guān)。
　　 2.PRRSV誘導(dǎo)IL-10表達(dá)依賴MyD88，與TRIF、RIG-I無關(guān)
　　 設(shè)計干擾分子psiTRIF、psiMyD88、psiRIG-I分別轉(zhuǎn)染PAM細(xì)胞，轉(zhuǎn)染psiMyD88后，無論是在轉(zhuǎn)錄水平還是蛋白水平均可下調(diào)PRRSV誘導(dǎo)的IL-10表達(dá)，而轉(zhuǎn)染psiTRIF、psiRIG-I并不影響PRRSV誘導(dǎo)的IL-10表達(dá)。利用IL-10熒光素酶報告系統(tǒng)檢測PRRSV感染Marc-145細(xì)胞

5、和HEK293-CD163細(xì)胞后IL-10的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)PRRSV感染Marc-145細(xì)胞可誘導(dǎo)IL-10的上調(diào)，48h尤為明顯；而PRRSV感染HEK293-CD163細(xì)胞，IL-10的表達(dá)無明顯上調(diào)，而HEK293-CD163缺乏TLRs，由此說明PRRSV感染誘導(dǎo)IL-10的產(chǎn)生與TLRs模式受體相關(guān)，并且依賴于MyD88，而與TRIF，RIG-I無關(guān)。
　　 3.PRRSV激活I(lǐng)L-10的產(chǎn)生與轉(zhuǎn)錄因子NF-κB有關(guān)<

6、br>　　 用不同濃度(1μM、5μM、10μM、20μM)的NF-κB抑制劑BAY11-7082處理PAM細(xì)胞，PRRSV感染48h后收樣，real-time RT-PCR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn)BAY11-7082處理顯著下調(diào)PRRSV誘導(dǎo)的IL-10表達(dá)，并存在劑量依賴性；而抑制IκBα后PRRSV誘導(dǎo)的IL-10表達(dá)水平顯著上調(diào)，由此可見，NF-κB參與調(diào)控PRRSV上調(diào)IL-10的產(chǎn)生。
　　 4.PRRSV感染PAM細(xì)

7、胞激活I(lǐng)L-10的產(chǎn)生與p38/MAPK通路有關(guān)
　　 用MAPK三條通路的特異性抑制劑SP600125、U0126、SB202190分別處理PAM細(xì)胞，PRRSV感染48h后收樣，real-time RT-PCR和ELISA檢測IL-10的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)抑制劑SB202190對PRRSV誘導(dǎo)IL-10表達(dá)的抑制作用明顯，U0126處理后IL-10的表達(dá)水平無明顯變化，而高濃度的SP600125反而能促進(jìn)IL-10的激活。SB2