風(fēng)濕性心臟病房顫患者心房纖維化機(jī)制的初步研究.pdf

1、心房顫動(dòng)（atrial fibrillation，AF）（房顫）是臨床最常見(jiàn)的心律失常，是許多疾病的臨床表現(xiàn)之一，有很高的致病率和致死率。房顫的發(fā)生機(jī)制至今尚未明確。目前認(rèn)為房顫時(shí)存在心房離子通道電重構(gòu)和心房組織結(jié)構(gòu)重構(gòu)。而心房纖維化是房顫患者心房組織結(jié)構(gòu)重構(gòu)最突出的表現(xiàn)。局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin angiotensin system，RAS）激活，細(xì)胞因子，特別是堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast g

2、rowthfactor，bFGF）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）在纖維化性疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。有研究表明TGF-β1在肺靜脈的表達(dá)水平升高，可能解釋持續(xù)性房顫患者肺靜脈周?chē)鷧^(qū)域有嚴(yán)重的間質(zhì)纖維化改變。但心房纖維化的具體機(jī)制尚不完全清楚。TGF-β1和bFGF在房顫患者心房肌中表達(dá)及心房纖維化中的作用國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道較少。在房顫患者心房肌中血管緊張素Ⅱ（An

3、giotensinⅡ，AngⅡ）是否通過(guò)血管緊張素Ⅱ1型受體（AngiotensinⅡ type1 receptor，AT1-R）調(diào)控TGF-β1國(guó)內(nèi)外也未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
　　 本研究共分為三部分：第一部分探討風(fēng)心病心房顫動(dòng)患者心房纖維化改變；第二部分探討RAS在風(fēng)心病心房顫動(dòng)患者心房纖維化中的作用；第三部分探討細(xì)胞因子TGF-β1和bFGF與房顫心房纖維化。采用ELISA、免疫組化、半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白質(zhì)印跡等技術(shù)，

4、通過(guò)檢測(cè)風(fēng)濕性心臟病不同類(lèi)型房顫患者血清中AngⅡ、bFGF及TGF-β1的水平變化，心房組織中Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、AT1-R、bFGF、TGF-β1等的表達(dá)和定位，及其基因轉(zhuǎn)錄水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異等，來(lái)探討它們?cè)谛姆坷w維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用、相關(guān)性等。為研究房顫心房纖維化的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)房顫的預(yù)防及尋找新的治療靶點(diǎn)有重要的理論和臨床指導(dǎo)意義。
　　 目的：
　　 1、通過(guò)檢測(cè)各型房顫心房組織中膠原含

5、量及分布情況，來(lái)探討心房顫動(dòng)患者心房纖維化的變化情況，進(jìn)一步證實(shí)心房纖維化是房顫發(fā)生發(fā)展過(guò)程中重要的組織結(jié)構(gòu)重構(gòu)。
　　 2、通過(guò)檢測(cè)各型房顫患者血清AngⅡ水平變化及心房組織內(nèi)AT1一R mRNA和蛋白水平表達(dá)變化，初步探討RAS在心房顫動(dòng)患者心房纖維化中的作用及其機(jī)制。
　　 3、通過(guò)檢測(cè)各型房顫患者血清細(xì)胞因子TGF-β1和bFGF水平變化及心房組織內(nèi)TGF-β1和bFGF的mRNA和蛋白水平表達(dá)變化，初步探討細(xì)胞

6、因子TGF-β1和bFGF在心房顫動(dòng)患者心房纖維化中的作用，為房顫的預(yù)防及治療尋找新的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)參考。
　　 方法：
　　 1、通過(guò)收集風(fēng)濕性心臟?。L(fēng)心?。┗颊吲R床資料及開(kāi)胸手術(shù)時(shí)心房組織標(biāo)本，分為竇性心律組、陣發(fā)性房顫組、持續(xù)性房顫組，以先天性心臟病竇性心律患者心房組織為對(duì)照，采用Masson染色法檢測(cè)心房組織膠原分布，采用羥脯氨酸法檢測(cè)心房組織膠原含量，采用RT-PCR法檢測(cè)心房組織Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原mRNA的表

7、達(dá)變化。
　　 2、通過(guò)ELISA法檢測(cè)各組患者血清AngⅡ水平變化；采用免疫組化法檢測(cè)心房組織中AT1-R的表達(dá)及分布情況；采用RT-PCR法檢測(cè)各組心房組織中AT1-R mRNA的表達(dá)變化；采用western blot法檢測(cè)各組心房組織中AT1-R蛋白水平的表達(dá)變化。
　　 3、通過(guò)ELISA法檢測(cè)各組患者血清TGF-β1和bFGF水平變化；采用免疫組化法檢測(cè)心房組織中TGF-β1和bFGF表達(dá)及分布情況；采用RT-

8、PCR法檢測(cè)各組心房組織中TGF-β1和bFGF mRNA的表達(dá)變化；采用western blot法檢測(cè)各組心房組織中TGF-β1和bFGF蛋白水平的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、共收集到有效病例共48例，其中風(fēng)心病竇性心律組8例，風(fēng)心病陣發(fā)性房顫組10例，風(fēng)心病持續(xù)性房顫組20例，對(duì)照先心病竇性心律組10例。臨床資料表明持續(xù)性房顫組左房?jī)?nèi)徑（LAd）明顯大于竇性心律組（P<0.05），各組間年齡、性別、左室射血分

9、數(shù)（LVEF）及瓣膜病變等差異無(wú)顯著性（P>0.05）。
　　 2、膠原分布Masson染色可見(jiàn)藍(lán)色膠原纖維主要分布在心肌間質(zhì)中。先心病竇性心律對(duì)照組、風(fēng)心病竇性心律組、風(fēng)心病陣發(fā)性房顫組、風(fēng)心病持續(xù)性房顫組，在各組心肌中表達(dá)陽(yáng)性逐漸增強(qiáng)。羥脯氨酸法膠原含量檢測(cè)結(jié)果及膠原染色圖像半定量分析顯示，與風(fēng)心病竇性心律組相比，膠原含量在陣發(fā)性房顫組（P<0.05）和持續(xù)性房顫組均顯著增加（P<0.01）；與陣發(fā)性房顫組相比，持續(xù)性房顫組

10、中膠原含量繼續(xù)明顯增加（P<0.05）；與先心病竇性心律組相比，風(fēng)心病竇性心律組膠原含量也明顯增加（P<0.05）。
　　 3、RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果表明心房組織Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)在先心病竇性心律對(duì)照組、風(fēng)心病竇性心律組、風(fēng)心病陣發(fā)性房顫組、風(fēng)心病持續(xù)性房顫組，表達(dá)量逐漸增加。其中Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)量各組比較有顯著差異性（P<0.05），但Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)量在風(fēng)心各組比較無(wú)顯著差異性（P>0.05）。

11、r>　　 4、在先心病竇性心律對(duì)照組、風(fēng)心病竇性心律組、風(fēng)心病陣發(fā)性房顫組、風(fēng)心病持續(xù)性房顫組，血清AngⅡ水平逐漸增加，各組比較有顯著差異性（P<0.05）；心房組織中AT1-R在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿均有表達(dá)，呈棕色顆粒狀，主要表達(dá)在心房肌細(xì)胞。AT1-R在心房組織中免疫組化檢測(cè)、mRNA及蛋白水平檢測(cè)各組比較有降低趨勢(shì)。免疫組化水平檢測(cè)各組比較無(wú)顯著差異性（P>0.05）；mRNA水平風(fēng)心持續(xù)性房顫組與風(fēng)心竇律組比較有顯著差異性（P<0

12、.01）；蛋白水平各組比較有顯著差異性（P<0.05）。
　　 5、在先心病竇性心律對(duì)照組、風(fēng)心病竇性心律組、風(fēng)心病陣發(fā)性房顫組、風(fēng)心病持續(xù)性房顫組，血清TGF-β1水平逐漸增加，各組比較有顯著差異性（P<0.05）；心房組織中TGF-β1主要表達(dá)于心肌細(xì)胞胞漿，部分表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕色顆粒狀。TGF-β1在心房組織中免疫組化檢測(cè)、mRNA表達(dá)及蛋白水平檢測(cè)各組比較逐漸增加，有顯著差異性（P<0.05）。
　　 6、在先

13、心病竇性心律對(duì)照組、風(fēng)心病竇性心律組、風(fēng)心病陣發(fā)性房顫組、風(fēng)心病持續(xù)性房顫組，血清bFGF水平逐漸增加，各組比較有顯著差異性（P<0.05）；心房組織中bFGF主要表達(dá)于心肌細(xì)胞胞漿，呈棕色細(xì)顆粒狀。bFGF在心房組織中免疫組化檢測(cè)、mRNA表達(dá)及蛋白水平檢測(cè)各組比較逐漸增加，有顯著差異性（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、在風(fēng)心病竇性心律組、陣發(fā)性房顫組、持續(xù)性房顫組中，心房組織膠原含量逐漸增加，特別是Ⅰ型膠原

14、，提示房顫的發(fā)生和維持與心房纖維化膠原代謝有關(guān)，心房纖維化是房顫發(fā)生發(fā)展過(guò)程中重要的組織結(jié)構(gòu)重構(gòu)。
　　 2、血清AngⅡ水平與房顫的發(fā)生和維持有重要作用，可能參與心房纖維化膠原代謝；心房組織中AT1-R mRNA表達(dá)及蛋白水平與心房纖維化程度有相反趨勢(shì)，可能存在負(fù)反饋機(jī)制，值得進(jìn)一步研究。
　　 3、細(xì)胞因子TGF-β1和bFGF可能參與心房纖維化膠原代謝，對(duì)房顫的發(fā)生和維持有重要作用，可能成為房顫抗纖維化治療的靶點(diǎn)之