PTEN和p-AKT1蛋白在胃癌及癌前病變中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　 本研究采用免疫組化方法,通過檢測(cè)正常胃黏膜、慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生及胃癌組織中PTEN和p-AKT1蛋白的表達(dá),分析二者表達(dá)的差異性和相關(guān)性,并探討二者表達(dá)與胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系和臨床病理意義。
　　 方法：
　　 臨床病例收集及組織芯片制作:收集中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)切除胃癌標(biāo)本134例(其中113例距癌灶邊緣大于5cm處取配對(duì)正常胃黏膜作為對(duì)照),慢性萎縮性胃炎1

2、5例,腸上皮化生46例及異型增生5例。常規(guī)石蠟包埋,組織蠟塊行4μm組織切片,常規(guī)HE染色,用于目標(biāo)組織的定位。采用組織芯片制作儀構(gòu)建胃癌及癌前病變組織芯片蠟塊,行4μm連續(xù)切片。
　　 免疫組化染色及結(jié)果判定方法:采用PV-9000免疫組化二步法檢測(cè)正常胃黏膜、慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生及胃癌中PTEN和p-AKT1蛋白的表達(dá)。兔抗人PTEN多克隆抗體購(gòu)自博奧森公司,工作濃度為1:100,工作濃度1:100,兔抗人p

3、-AKT1單克隆抗體購(gòu)自博奧森公司,工作濃度1:100。免疫組化及DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物有限公司。用PBS緩沖液代替一抗做陰性對(duì)照。結(jié)果判定:PTEN和p-AKT1蛋白在細(xì)胞漿呈現(xiàn)清晰棕黃色特異性免疫反應(yīng)顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每一病例隨機(jī)選擇2個(gè)高倍鏡視野,計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,陽(yáng)性細(xì)胞占計(jì)數(shù)同類細(xì)胞百分率＜5%為0分,5%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,＞75%為4分。染色強(qiáng)度以陽(yáng)性細(xì)胞呈色反應(yīng)為準(zhǔn):無

4、特異著色為0分,淺黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分;然后按染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比的乘積將結(jié)果分為:0分為陰性(一);1～4分為弱陽(yáng)性(+);5～8分為中度陽(yáng)性(++),9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。
　　 結(jié)果：
　　 PTEN蛋白在胃癌組織(40.3%)表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于正常胃黏膜(80.5%)、腸上皮化生(84.8%)和異型增生(100%),P＜0.05。胃癌組織中PTEN蛋白表達(dá)與胃癌患者的性別、年齡

5、、胃癌的Borrmann分型、WHO組織學(xué)分型、Lauren分型、TNM分期均無顯著相關(guān)(P＞0.05)。
　　 p-AKT1蛋白在腸上皮化生(80.4%)和胃癌組織(73.1%)中表達(dá)的陽(yáng)性率均顯著高于正常胃黏膜(34.5%)(P＜0.05)。P-AKT1蛋白表達(dá)與胃癌患者的性別、年齡、胃癌的Borrmann分型、WHO組織學(xué)分型、Lauren分型、TNM分期均無顯著相關(guān)(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：