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文檔簡介
1、目的:不育癥是男科學研究的主要內容之一,精子畸形與男性不育密切相關。本次研究采用甲基磺酸甲酯(methyl methanesulphonate,MMS)制造精子形態(tài)異常大鼠模型。研究優(yōu)精顆粒對模型大鼠精子形態(tài)、密度、活率的影響,研究相關基因、蛋白的表達;并從內分泌、氧化應激角度探討其作用機制。
方法:SD大鼠48只,隨機分正常對照組、MMS組、優(yōu)精顆粒低、中、高劑量組、維生素E組共6組,每組8只。除正常組外,其余40只大鼠均先
2、用MMS給大鼠灌胃,連續(xù)5天,制造出精子形態(tài)異常大鼠模型。之后給予維生素E及優(yōu)精顆粒(分低、中、高劑量給藥)治療,連續(xù)48天,與此同時,正常組大鼠給予等量的大鼠飲用水灌胃。第49天,水合氯醛腹腔注射麻醉,摘取大鼠睪丸和附睪,心尖部取血備用。
然后進行以下內容的檢測:
1,檢測各組大鼠附睪的精子濃度、活率和精子形態(tài);
2,取一側睪丸進行石蠟切片,在光學顯微鏡下觀察各組大鼠睪丸組織的形態(tài)學改變;
3,
3、檢測各組大鼠血清睪酮水平;
4,檢測各組大鼠血清氧化應激指標;
5,用RT-PCR方法檢測各組大鼠睪丸組織中生殖相關(精子發(fā)生、精子形態(tài))基因的表達差異;
6,用免疫組化方法檢測Vasa、Plzf、 Sycp3、Sox9在各組大鼠睪丸組織中的表達。
結果:與正常對照組相比: MMS組大鼠附睪的精子濃度與活率明顯下降,精子畸形率明顯升高;光鏡下生精小管退化,各級生精細胞數量減少、層次不清晰;血清睪酮
4、水平明顯降低;血清氧化指標(超氧陰離子、羥基自由基)明顯升高,抗氧化指標(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶)明顯降低;RT-PCR顯示,睪丸組織中生殖細胞細胞相關基因Vasa、Dazl表達明顯降低,精子細胞階段相關蛋白Acrosin的表達也明顯降低;免疫組化顯示,睪丸組織中生殖細胞相關基因Vasa表達的量也明顯減少。
與MMS組比較:優(yōu)精顆粒低、中、高劑量組大鼠附睪的精子濃度與活率均顯著增加,精子畸形率顯著降低。在與MMS組
5、比較中:維生素E組、及優(yōu)精顆粒組在精子濃度、活率、精子畸形率、光鏡下睪丸曲細精管組織、氧化應激指標、睪丸組織中Vasa、Dazl、Acrosin的表達等各方面均有顯著差異。
與VE組比較:優(yōu)精顆粒組大鼠在精子活率、精子畸形率、光鏡下曲細精管組織、血清睪酮、睪丸組織中Vasa、Dazl、Acrosin的表達的量這幾個方面均占明顯優(yōu)勢。
結論:MMS可以造成精子形態(tài)異常的大鼠模型。MMS對于整個生精過程中的后期(即精細胞
6、形成及精子成熟過程)有一定的影響,從而導致畸形精子增加,同時引起大鼠精子數量、活率等降低,而VE對于其有一定的修復功能。
優(yōu)精顆粒對于MMS致畸的修復能力要優(yōu)于VE,從而可以更好地提高(或降低)各項指標,且無論VE或者優(yōu)精顆粒,其對血睪屏障都沒有影響,會順利通過血睪屏障而發(fā)揮作用。
優(yōu)精顆??梢悦黠@提高模型大鼠生殖細胞相關基因Vasa、Dazl的表達,明顯提高與精細胞階段相關基因Acrosin的表達。我們推測,優(yōu)精顆
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