COX-2對(duì)脂變BRL-3A細(xì)胞TG代謝及PPAR-γ、CPT-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究COX-2沉默與過(guò)表達(dá)對(duì)BRL-3A脂變及脂代謝相關(guān)基因PPAR-γ、CPT-1表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1、篩選最佳醫(yī)用脂肪乳濃度，制備肝細(xì)胞脂變模型：不同濃度脂肪乳(1％、2%、4%、6%、8%、10%)培養(yǎng)BRL-3A24h后通過(guò)油紅蘇木素染色法觀察細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況、采用ELISA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG含量、MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性確定誘導(dǎo)細(xì)胞脂變的最佳脂肪乳濃度。
　　2、實(shí)驗(yàn)分為

2、正常BRL-3A組、脂變BRL-3A對(duì)照組、pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA組、pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-rCOX-2組、pcDNA3.1(+)-HK組、尼美舒利200ug/ml陽(yáng)性對(duì)照組；除正常BRL-3A組外，其他各組均以6%脂肪乳溶液誘導(dǎo)24h，各轉(zhuǎn)染組分別利用lipofectamineTM2000將對(duì)應(yīng)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入各組細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24h后ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)TG含

3、量,了解COX-2沉默或過(guò)表達(dá)對(duì)BRL-3A細(xì)胞內(nèi)TG水平的影響；RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞COX-2及脂代謝相關(guān)基因PPAR-γ、CPT-1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、隨脂肪乳濃度增加，油紅蘇木素染色顯示BRL-3A內(nèi)紅色小泡性脂滴增多，ELISA檢測(cè)顯示TG含量增加，MTT檢測(cè)顯示OD值下降。6%脂肪乳溶液誘導(dǎo)后BRL-3A內(nèi)T G含量較正常肝細(xì)胞組明顯增加，且細(xì)胞存活率大于90%，故將6%確定為實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)BRL

4、-3A脂變的最佳脂肪乳濃度。
　　2、轉(zhuǎn)染后，ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)TG含量，RT-PCR檢測(cè)各組COX-2、PPAR-γ、CPT-1 mRNA的表達(dá)：
　　(1)與正常BRL-3A組相比，脂變BRL-3A對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)TG含量明顯增加， COX-2 mRNA表達(dá)增加，PPAR-γ、CPT-1 mRNA表達(dá)減少；
　　(2)與脂變BRL-3A對(duì)照組相比，pYr-1.1-hU6-EGFP-COX-2 shRNA組和尼美舒

5、利200ug/ml陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)TG含量均減少，COX-2 mRNA表達(dá)均減少， PPAR-γ、CPT-1 mRNA表達(dá)均增加，以前者較為明顯；
　　(3)與脂變BRL-3A對(duì)照組相比，pcDNA3.1(+)-rCOX-2組細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，COX-2 mRNA表達(dá)增加，PPAR-γ、 CPT-1 mRNA表達(dá)減少；
　　(4)pYr-1.1-hU6-EGFP-HK組、pcDNA3.1(+)-HK組與脂變BRL-3A對(duì)照

6、組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1、6%脂肪乳溶液誘導(dǎo)BRL-3A可成功建立體外肝細(xì)胞脂肪變性模型。
　　2、BRL-3A脂變后，細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，COX-2表達(dá)升高，脂代謝相關(guān)基因PPAR-γ、CPT-1表達(dá)降低。
　　3、COX-2沉默或抑制后，BRL-3A細(xì)胞COX-2表達(dá)降低，PPAR-γ、CPT-1表達(dá)升高，細(xì)胞內(nèi)TG含量減少。
　　4、COX-2過(guò)表達(dá)后，BRL-3A細(xì)胞 COX-2表