黃嘌呤氧化酶和對氧磷酶1與非酒精性脂肪性肝病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是因脂質(zhì)代謝異常并排除過量的飲酒史和其它明確的肝損因素所致的肝臟氧化應(yīng)激性病變,在組織病理學(xué)上主要表現(xiàn)為以下幾種形式：單純性脂肪肝(non-alcoholic simple fatty liver, NAFL)、脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)、脂肪性肝纖維化和肝硬化,這幾種形式可單獨(dú)

2、或者混合存在,因而臨床上NAFLD的表現(xiàn)形式多樣化。當(dāng)病變進(jìn)展到NASH階段,很容易繼續(xù)發(fā)展為脂肪性肝纖維化和肝硬化。本研究以生理途徑攝入高脂飲食建立NAFLD大鼠模型,采用油酸(oleic acid , OA)作用于體外培養(yǎng)的正常肝細(xì)胞建立NAFLD體外模型,同時用a-硫辛酸(a-Lipoic acid,a-LA)對NAFLD模型進(jìn)行預(yù)防性干預(yù),觀察黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XOD)和對氧磷酶1(paraoxo

3、n-1,PON1)活性的改變及α-LA對NAFLD大鼠和NAFLD肝細(xì)胞的防治作用并探討XOD和PON1活性與NAFLD嚴(yán)重程度的關(guān)系。
　　生理途徑攝入高脂飲食(HFD)制備NAFLD大鼠模型,設(shè)置正常組,NAFLD模型組,α-LA(20mg/kg、40mg/kg)組,每組動物數(shù)8只,實(shí)驗(yàn)連續(xù)進(jìn)行12周。測定血清和肝勻漿中脂質(zhì)指標(biāo)(總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA));計算肝指數(shù)(LI);檢測氧化應(yīng)激指標(biāo)(

4、黃嘌呤氧化酶(XOD)、對氧磷酶(PON1)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHpx)、過氧化氫酶(CAT)、總抗氧化能力(TAOC))等水平;新鮮的肝臟經(jīng)處理后進(jìn)行HE染色,用光鏡觀察大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)的改變。結(jié)果顯示:HFD飼養(yǎng)12周,模型組產(chǎn)生明顯的NAFLD癥狀,表現(xiàn)為血脂紊亂、肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積及氧化應(yīng)激。模型組TG、FFA水平和XOD活力、MDA含量明顯升高,PON1則降低

5、。與模型組比較,α-LA治療對HFD致大鼠NAFLD能顯著降低肝脂質(zhì)沉積及TG、FFA水平,可減輕NAFLD大鼠明顯增加的LI,降低升高的XOD水平,同時使其降低的PON1水平有所恢復(fù)。病理結(jié)果顯示,與NAFLD模型組比較,α-LA組大鼠肝臟脂質(zhì)變性程度明顯減輕,可能與其抑制氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化作用有關(guān)。
　　采用油酸體外誘導(dǎo)L-02細(xì)胞24h,建立肝細(xì)胞脂肪變性的細(xì)胞模型。以油紅O染色電鏡下觀察細(xì)胞中脂滴情況,并據(jù)此為評價指標(biāo)判

6、斷NAFLD細(xì)胞模型的形成與否。實(shí)驗(yàn)分為6組:正常細(xì)胞組(Normal)、OA模型組(M)、OA+α-LA(50,100,200,400mmol/L)組,每組設(shè)6個復(fù)孔,培養(yǎng)24h后收集肝細(xì)胞,MTT法測細(xì)胞活力,考察不同濃度的α-LA與NAFLD細(xì)胞模型內(nèi)TG和FFA含量,XOD和PON1活力的影響,以探討α-LA對體外培養(yǎng)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝和氧化應(yīng)激的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)通過油紅O染色觀察細(xì)胞中的脂滴及結(jié)合MTT,發(fā)現(xiàn)60mg/m

7、L的OA和不同濃度的α-LA對細(xì)胞活性無顯著影響,且60mg/mL的OA模型細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴集聚明顯,是誘導(dǎo)細(xì)胞脂肪變性的最佳濃度。(2)正常肝細(xì)胞用60mg/mLOA孵育24h后,FFA含量明顯升高,顯示高脂質(zhì)沉積狀態(tài),即誘導(dǎo)了肝細(xì)胞脂肪變性模型的形成并伴隨細(xì)胞脂質(zhì)代謝紊亂。(3)a-LA能夠逆轉(zhuǎn)OA誘導(dǎo)的FFA含量增加,減少由OA造成的細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集。(4)OA引起細(xì)胞氧化還原失衡,XOD的活力增高,PON1的活力則降低。不同濃度的a

8、-LA與OA和肝細(xì)胞共同孵育24h后,與模型組比較,肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷呈現(xiàn)一定的逆轉(zhuǎn)作用,XOD活性有不同程度的降低,PON1則相反。
　　臨床患者的研究表明,NAFLD患者較正常人XOD活性升高,PON1活性降低,且隨病情嚴(yán)重程度的增加,XOD的活性顯著增高,PON1則相反。
　　以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,NAFLD中,XOD活力升高,同時PON1活力降低,且在NAFLD形成的不同時期存在顯著性差異,造模時間越長,XOD的活力越