產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌ST-LTB融合蛋白不同佐劑納米疫苗的篩選及其免疫原性研究.pdf

1、本文以明膠、PEG-400、卵磷脂、膽固醇、大豆油、殼聚糖等作為載體材料，輔以蜂膠、卡波姆、span-60與tween-80 等佐劑或表面活性劑，采用納米技術(shù)制備了六種不同佐劑配方的載產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌腸毒素ST-LTB基因工程融合蛋白的納米疫苗，在此基礎(chǔ)上對其進行了免疫原性研究，為制備有效預(yù)防ETEC的新型疫苗提供了理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 （1)應(yīng)用IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌ST-LTB融合基因表達，并對最優(yōu)的誘導(dǎo)表達條

2、件進行了篩選，獲取了大量包涵體蛋白并進行了純化。SDS-PAGE結(jié)果表明，所獲得的包涵體蛋白純度滿足要求，可以作為免疫抗原使用。
　　 （2)利用超聲破碎法及卡波姆、span-60、tween-80等表面活性劑的活化作用，將純化的ST-LTB蛋白包裹入適量的納米佐劑材料中，制備了明膠復(fù)合佐劑、大豆油復(fù)合佐劑、卵磷脂復(fù)合佐劑、PEG-400復(fù)合佐劑（無蜂膠）、PEG-400復(fù)合佐劑（含蜂膠）、殼聚糖復(fù)合佐劑六種候選納米疫苗，所得產(chǎn)

3、物分屬于納米球、納米脂質(zhì)體和納米乳液三種納米體系。采用考馬斯亮藍G-250法和透射電鏡法，對六種納米疫苗的載藥率、包封率和粒徑等主要工藝指標進行了測定。結(jié)果表明，載藥率依次為84.88%、73.66%、86.20%、72.12%、73.22%、59.69%，包封率為45.02%、19.25%、32.03%、21.85%、23.67%、17.52%；得到的載ST-LTB基因工程融合蛋白納米顆粒呈球形，粒徑分布范圍為75-120nm。

4、>　　 （3)通過動物試驗對六種不同佐劑配方的候選納米疫苗進行了安全性檢測。結(jié)果表明殼聚糖復(fù)合佐劑會造成小鼠的嚴重不良反應(yīng)甚至死亡，其它佐劑的候選納米疫苗免疫后未見小鼠異常反應(yīng)，且組織病理學切片結(jié)果亦顯示未造成試驗小鼠組織損傷；在此基礎(chǔ)上，采用了不同配方的候選納米疫苗對18-22g小鼠進行免疫，于免疫7天后每三天采血一次，以ELISA法測定免疫動物的抗體滴度水平；28天后用大腸桿菌強毒株C83922進行攻毒試驗，測定免疫保護率，評價不