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文檔簡(jiǎn)介
1、牛膝(AchyranthesbidentataBlume.)為石竹目莧科牛膝屬多年生草本植物,是我國(guó)常用的大宗中藥材之一。中醫(yī)學(xué)上牛膝歸肝、腎經(jīng),具有補(bǔ)肝腎,強(qiáng)筋骨,活血通經(jīng),引火下行,利尿通淋等功效。多用于月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、閉經(jīng)、產(chǎn)后淤阻腹痛、跌打損傷及腰膝酸痛、下肢無(wú)力、尿血、小便不利、尿道澀痛等癥,為臨床常用中藥?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明牛膝還具有抗衰老、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛消炎、提高機(jī)體免疫力等多種功效。
牛膝入藥往往只使用其干燥
2、的根,大量的藥理、臨床研究都集中在其根部,地上部分如種子、葉子等的研究并不是很多,且多數(shù)都只停留在對(duì)其營(yíng)養(yǎng)成分的分析方面。在揚(yáng)州民間,常常用牛膝地上部分泡茶飲,用以緩解咽部不適,效果較佳??疾旃偶c現(xiàn)代臨床資料我們也找到了類(lèi)似的醫(yī)案,只是相關(guān)可供參考的科學(xué)理論依據(jù)并不是很多。
本課題以懷牛膝(牛膝在傳統(tǒng)中藥藥材質(zhì)量中,以河南懷慶府所產(chǎn)的“懷牛膝”質(zhì)量最好)地上部分為主要原料,對(duì)其清咽功能進(jìn)行研究,具體研究?jī)?nèi)容包括:
3、 1.懷牛膝地上部分抗炎活性的檢測(cè)
參考《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003)中“清咽功能”的評(píng)價(jià)方法,選擇大鼠足趾腫脹試驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)懷牛膝粗提物和正丁醇有機(jī)相的抗炎活性。結(jié)果表明,正丁醇萃取部位的抗炎活性能力最強(qiáng),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與空白組比較顯著性差異明顯。其有效劑量為750mg/kg。
2.抗炎活性部位的定性、定量及抗炎活性能力研究
采用顯色反應(yīng)如Libermann反應(yīng)、Molish反應(yīng)等
4、和泡沫反應(yīng)試驗(yàn)對(duì)抗炎活性部位進(jìn)行定性研究,結(jié)果表明抗炎活性物質(zhì)為酸性皂苷類(lèi)化合物。
抗炎活性物質(zhì)的定量研究,以齊墩果酸為對(duì)照品,利用HPLC法對(duì)活性物質(zhì)進(jìn)行分析,最終確立分析的色譜條件為:色譜柱Zorbax300SB-Cl8(4.6mm×150mm,5um),最佳流動(dòng)相為甲醇∶水=88:12,流速:1.0ml/min,柱溫:35℃,進(jìn)樣量:10μl。經(jīng)計(jì)算,樣品中齊墩果酸的含量為1.2%。從而確定懷牛膝地上部分原料中具有清
5、咽功能的主要活性物質(zhì)為五環(huán)三萜皂苷,皂苷元為齊墩果酸。
以大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)對(duì)懷牛膝皂苷的抗炎活性規(guī)律進(jìn)行研究,共設(shè)5個(gè)組別,分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組和3個(gè)受試樣品劑量組。各組分別按1ml/100g灌胃量給藥。第一組為空白對(duì)照組灌胃給予10ml/kg蒸餾水,第二組為陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予50mg/kg阿司匹林,第三組為懷牛膝總皂苷小劑量組,灌胃給予400mg/kg的受試物,第四組為懷牛膝總皂苷中劑量組,灌胃給予800mgkg
6、的受試物,第五組為懷牛膝總皂苷高劑量組,灌胃給予1200mg/kg的受試物。每日清晨空腹灌胃,晚間禁食12h,不控制飲水,連續(xù)給藥30天。結(jié)果表明,中劑量組800mg/kg和高劑量組1200mg/kg灌胃給藥30天后給予致炎劑,分別在1小時(shí)、3小時(shí)、5小時(shí)、7小時(shí)時(shí)足趾厚度的差值與對(duì)空白照組相比差異顯著,經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析,p<0.01或p<0.05,表明該濃度的受試樣品對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物具有清咽功能,且抗炎功效可維持7小時(shí)之久。小劑量組即
7、每公斤體重給藥400mg組沒(méi)有表現(xiàn)出抗炎消腫的功能,SPSS統(tǒng)計(jì)分析的p>0.05。
3.毒理學(xué)檢驗(yàn)
從急性毒理和30喂養(yǎng)試驗(yàn)兩方面對(duì)牛膝總皂苷進(jìn)行毒理學(xué)檢驗(yàn)。
急性毒性試驗(yàn),選用清潔級(jí)Wistar大鼠12只,雌雄性別各半,適應(yīng)喂養(yǎng)7天后用于實(shí)驗(yàn)。按外來(lái)化學(xué)物急性毒性分級(jí)中微毒(5000mg/kg)劑量灌胃給予大白鼠。連續(xù)觀(guān)察14天,觀(guān)察實(shí)驗(yàn)大白鼠的各種性狀,并記錄中毒癥狀和死亡情況。通過(guò)14天
8、喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)后觀(guān)察,12只大鼠(雌雄各半)飲食、活動(dòng)糞便情況正常,生長(zhǎng)發(fā)育良好,無(wú)一只出現(xiàn)明顯中毒癥狀,也無(wú)一只死亡,基本證明懷牛膝抗炎活性部位安全性很高。
通過(guò)30天的喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)后觀(guān)察,大鼠飲食、活動(dòng)糞便情況正常,生長(zhǎng)發(fā)育良好,無(wú)一只死亡。大鼠的肝、血液循環(huán)系統(tǒng)、腸胃系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、造血或凝血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、眼、呼吸系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、皮膚和肌肉的一般檢查均無(wú)異常反應(yīng)出現(xiàn),基本證明懷牛膝總皂苷無(wú)毒
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