單?；视椭久冈诖竽c癌中的作用及其作用機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：越來(lái)越多的流行病學(xué)調(diào)查研究表明，隨著肥胖患病率的日益提高，其所引起的社會(huì)負(fù)擔(dān)，除了已經(jīng)證實(shí)的相關(guān)疾病如高脂血癥，胰島素抵抗，糖尿病，心血管疾病等之外，還和許多腫瘤的患病率有明顯相關(guān)性。這使得肥胖的社會(huì)危害大增，甚至有研究表明其危害作用已經(jīng)超過(guò)了煙草濫用。目前，隨著流行病學(xué)研究的深入，肥胖和腫瘤的關(guān)系也進(jìn)一步明確，探索肥胖與腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究就成為目前研究的焦點(diǎn)。但是目前對(duì)于肥胖是如何增加腫瘤易感性或者說(shuō)肥胖如何增加了致癌性還并不清

2、楚。其中脂代謝的異?？赡苁欠逝謱?dǎo)致腫瘤易感的原因之一，一項(xiàng)關(guān)于單?；久?MAGL)的研究為此提供了重要的證據(jù)。單酰基甘油脂肪酶，主要作用于脂肪的分解代謝，將單?；视退獠a(chǎn)生游離脂酸。研究表明MAGL在腫瘤的進(jìn)展中起到重要調(diào)節(jié)作用，同時(shí)MAGL 被敲低后，腫瘤的生長(zhǎng)明顯被抑制。根據(jù)MAGL在正常胃腸道中均有表達(dá)的特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)旨在探索MAGL在大腸癌中的表達(dá)以及其對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，同時(shí)為肥胖與大腸癌的關(guān)系尋找新的突破點(diǎn)。

3、　　 方法：通過(guò)免疫組化，RT-PCR法檢測(cè)MAGL在大腸癌組織中的表達(dá)，分別對(duì)其進(jìn)行定性和定量分析，比較患者病理特征與MAGL表達(dá)的關(guān)系。然后，我們分別使用siRNA和JZL184分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平抑制MAGL的表達(dá)，通過(guò)MTT 檢測(cè)細(xì)胞活性，transwell 檢測(cè)細(xì)胞侵襲性，流式細(xì)胞計(jì)數(shù)分析細(xì)胞周期，BrdU 檢測(cè)細(xì)胞增殖，末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡等方法來(lái)評(píng)價(jià)MAGL 敲低后對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。隨后，為了進(jìn)一步探索M

4、AGL在腫瘤細(xì)胞中作用的機(jī)制，我們通過(guò)RT-PCR對(duì)大腸癌細(xì)胞中部分增殖和凋亡的相關(guān)基因(cyclin D1，bcl-2，Mcl-1，cyclin E)進(jìn)行篩查。最后，建立大腸癌裸鼠移植瘤模型，通過(guò)比較MAGL 敲低后與未敲低的腫瘤細(xì)胞的致瘤性，以及JZL184 對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響，來(lái)判斷MAGL 敲低后對(duì)活體腫瘤的影響。
　　 結(jié)果：發(fā)現(xiàn)MAGL的表達(dá)在腫瘤組織中明顯升高(1.87±0.62)，遠(yuǎn)高于正常組織的(1.04±0.

5、62)(P＜0.05)，同時(shí)在患者的病理資料與MAGL表達(dá)中，我們發(fā)現(xiàn)僅有BMI指數(shù)與MAGL的表達(dá)有一定相關(guān)性(P＜0.05)，而其它并無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。進(jìn)一步的研究表明，MAGL 敲低后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受到明顯抑制，如LOVO細(xì)胞中，通過(guò)JZL184 作用后，細(xì)胞的增值率僅為25.1％，明顯低于對(duì)照組209.5％(P＜0.05)，凋亡率較對(duì)照組增加了7.8倍(P＜0.05)；而通過(guò)siRNA的作用后，細(xì)胞的增值率僅為28

6、.5％，亦明顯低于對(duì)照組的209.5％(P＜0.05)，凋亡率較對(duì)照組增加了6.1倍（P＜0.05)(其他結(jié)果詳見(jiàn)正文部分)。隨后，通過(guò)對(duì)部分細(xì)胞增殖與凋亡的相關(guān)基因的篩查，我們發(fā)現(xiàn)，bcl-2和cyclin D1的表達(dá)明顯減低，其中在轉(zhuǎn)錄水平，cyclin D1在LOVO，Caco-2和SW480中分別減低50.5％，78.8％和64.5％，而bcl-2分別減少65.4％，73.7％和51.6％ (蛋白水平減少詳見(jiàn)正文)。最后在移植瘤

7、模型中，我們發(fā)現(xiàn)，MAGL 敲低后腫瘤細(xì)胞Caco-2成瘤性明顯下降，1月后腫瘤體積縮小400mm 3，成瘤體積明顯小于對(duì)照組(P＜0.05)。而成瘤后給予JZL184 口服14天后，腫瘤體積也明顯縮小約300mm 3 (P＜0.05)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)表明MAGL 敲低后在體內(nèi)和體外均對(duì)大腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，對(duì)腫瘤細(xì)胞的活性，侵襲性及細(xì)胞周期都有明顯的抑制，同時(shí)，cyclin D1和bcl-2的表達(dá)也隨著MAG