獲得性純紅細胞再生障礙性貧血γδT細胞克隆性分析.pdf

1、研究目的：通過對獲得性純紅細胞再生障礙性貧血(PRCA)患者γδT細胞的T細胞受體(TCR)γ基因重排分析，探討在獲得性PRCA的患者體內是否存在克隆性增生的γδT細胞。 對象及方法：采用針對TCR-γ鏈基因的特異性引物和一步法RT-PCR擴增14例PRCA患者及10例正常人外周血γδT細胞的TCR-γ基因的CDR3區(qū)，并利用瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳及Bandleader3.0凝膠圖像分析檢測CDR3區(qū)長度的變化以判斷γδ

2、T細胞的克隆性，部分呈克隆性表型的病例通過直接測序證實。 結果：1、2％瓊脂糖電泳結果顯示：經RT-PCR，14例PRCA患者及10例正常對照均擴增獲得230bp(Ⅵ亞家族)或240bp(Ⅶ亞家族)左右的陽性條帶。 2、8％聚丙烯酰胺凝膠電泳及凝膠圖像分析顯示：14例PRCA患者中有4例PRCA患者(病例1和病例3的Ⅵ亞家族，病例4和病例8的Ⅶ亞家族)出現較濃集的單個條帶，凝膠圖像分析顯示為一基底較窄的銳利高峰與一些矮峰

3、，代表寡克??；其余的10例PRCA的患者和10例正常對照均表現為模糊寬帶或在模糊寬帶的背景上出現多條較濃集的條帶，凝膠圖像分析顯示灰度呈高斯分布的寬峰或多峰，代表多克隆。 3、結合臨床資料顯示，(1)采血時臨床狀況：3例初發(fā)患者中1例為寡克隆，2例為多克?。?例緩解者中有1例為寡克隆，其余均為多克??；5例復發(fā)患者中有2例為寡克隆，其余均為多克??；(2)環(huán)孢素治療療效：11例環(huán)孢素治療有效的患者中有4例出現寡克隆，3例環(huán)孢素治療無

4、效的患者均為多克隆。 4、2例寡克隆(病例1的Ⅵ亞家族和病例4的Ⅶ亞家族)RT-PCR產物送測序，結果與NCBI數據庫相比較，證實了這兩例患者外周血中克隆性增生的γδT細胞的存在。 結論：1、10/14例獲得性PRCA的患者外周血γδT細胞呈多克隆增生，提示γδT細胞在PRCA的發(fā)病中主要是一種反應性增生。 2、4/14例PRCA患者外周血γδT細胞呈寡克隆性增生，這4例患者對環(huán)孢素治療有效，是否存在γδT細胞的