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文檔簡(jiǎn)介
1、[目的]
通過(guò)建立糖尿病大鼠模型,觀察糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中G蛋白偶聯(lián)受體91(GPR91)對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的調(diào)控及視網(wǎng)膜病理改變的影響。進(jìn)一步探討糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中GPR91對(duì)VEGF表達(dá)的相關(guān)調(diào)控機(jī)制,為糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)的基因治療提供理論基礎(chǔ)。
[方法]
健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠通過(guò)一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病模型。構(gòu)建GPR91 shRNA
2、的慢病毒載體及相應(yīng)的慢病毒空載體。氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GS-MS)檢測(cè)不同時(shí)間段糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中琥珀酸的含量。Western blotting和免疫熒光檢測(cè)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中GPR91,p-ERK1/2和COX-2的表達(dá)的表達(dá)情況。HE染色,透射電鏡和依文思藍(lán)滲漏實(shí)驗(yàn)觀察14周糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管功能及超微結(jié)構(gòu)的變化。qPCR檢測(cè)COX-2和VEGF的mRNA表達(dá)。ELISA檢測(cè)玻璃體中PGE2和VEGF的分泌情況。
[結(jié)果
3、]
糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的琥珀酸含量較對(duì)照組有一定程度的增加(P<0.01),但GPR91的表達(dá)在對(duì)照組和糖尿病組中沒(méi)有明顯差異。14周的糖尿病組中,可觀察到視網(wǎng)膜內(nèi)層血管擴(kuò)張,內(nèi)核層細(xì)胞損傷,毛細(xì)血管的基底膜增厚以及血管滲漏增加等病理改變。在LV.shGPR91組中各種血管紊亂的情況均得到明顯改善,但損傷的內(nèi)核層細(xì)胞無(wú)明顯改變。糖尿病組中,p-ERK1/2、COX-2、PGE2及VEGF的表達(dá)均高于對(duì)照組。玻璃體腔注射 LV.
4、shGPR91慢病毒后,p-ERK1/2、COX-2、PGE2及 VEGF的表達(dá)顯著降低(P<0.01)。同時(shí),在玻璃體腔注射U0126組和NS-398組中,COX-2, PGE2及VEGF的表達(dá)也均明顯減少(P<0.01)。
[結(jié)論]
(1)成功建立了糖尿病大鼠模型,并觀察到糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中琥珀酸的蓄積, GPR91主要表達(dá)神經(jīng)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中及VEGF分泌的增加。
(2)通過(guò)構(gòu)建攜帶GPR91 shRNA
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