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1、 本文應(yīng)用體外研究的方法,在蛋白激酶C(PKC)亞型水平探討腎細(xì)胞癌的多藥耐藥機制及逆轉(zhuǎn),為腎細(xì)胞癌的治療提供實驗依據(jù)。 實驗分三部分:1、采用Western Blotting技術(shù)檢測30例腎癌組織及其周圍正常組織胞漿、胞膜中PKC-α的表達。2、采用基因工程技術(shù)構(gòu)建整合有PKC-基因和綠色熒光蛋白(GFP)基因的真核表達載體,利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法在體外將PKC-α基因?qū)肴四I癌786-0細(xì)胞,并檢測基因的表達情況。3、構(gòu)建整合有
2、PKC-α基因和綠色熒光蛋白(GFP)基因的真核表達載體,在體外將PKC-α基因?qū)肴四I癌786-0細(xì)胞,檢測PKC-αcDNA對腎癌786-0細(xì)胞的轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中MDR相關(guān)基因MDR1、MRP1、LRP的表達變化。 研究表明:1. PKC-α在腎癌腫瘤組織中存在膜轉(zhuǎn)位;在腎癌發(fā)生發(fā)展過程中可能起了重要的調(diào)控作用;與腎癌的病理分期和細(xì)胞分級密切相關(guān);是判斷腎癌分化、預(yù)后的一種理想指標(biāo);2.10﹪小牛血清的RPMI1640培
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