蛋白激酶C-α與自體靜脈移植后血管重塑關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：
　　 自體靜脈移植手術(shù)是肢體缺血性疾病或冠心病治療的重要手段之一，但術(shù)后移植物發(fā)生再狹窄，導(dǎo)致血管閉塞影響其長期療效。研究表明，移植物再狹窄和血管平滑肌細(xì)胞增殖密切相關(guān)，但其具體機(jī)制尚未完全闡明，其中涉及到一系列的細(xì)胞因子、功能性蛋白質(zhì)以及胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。蛋白激酶-C （PKC）是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，與細(xì)胞胞內(nèi)的多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程有關(guān)。其中的PKC-α是其傳統(tǒng)型同工酶中的一種，與多種細(xì)胞的增殖、分化有關(guān), 但

2、其是否參與移植靜脈的平滑肌增殖尚不明了。本研究擬采用兔自體靜脈移植模型，通過檢測移植靜脈內(nèi)的PKC-αmRNA與蛋白的變化，進(jìn)一步闡明其與血管平滑肌細(xì)胞增殖的關(guān)系，為尋找一種新的預(yù)防自體靜脈移植后再狹窄的治療方法提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、建立兔的頸部自體靜脈移植模型。
　　 2、光鏡觀察移植后血管內(nèi)膜增生病理情況。
　　 3、動態(tài)觀察移植后血管PKC-αmRNA、蛋白表達(dá)的變化。
　　

3、 3.1Real-Time PCR 法檢測移植靜脈PKC-αmRNA表達(dá)。
　　 3.2 Western Blot 法檢測移植靜脈PKC-α蛋白表達(dá)。
　　 3.3 SP免疫組織化學(xué)染色法檢測移植靜脈PKC-α蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、建立兔的頸部自體靜脈移植模型。
　　 1.1實(shí)驗(yàn)過程中，1例血管吻合失敗，1例手術(shù)后2周靜脈橋阻塞。損失樣本均補(bǔ)足。
　　 1.2 肉眼觀察：取

4、材時見動物切口愈合良好，未見感染，移植靜脈與周圍組織輕度粘連，移植靜脈搏動良好，移植靜脈管壁不同程度增厚,管腔不規(guī)則，呈靜脈動脈化表現(xiàn)。
　　 2、光鏡觀察移植后血管內(nèi)膜增生病理情況。
　　 光鏡下見假手術(shù)組正常靜脈內(nèi)膜為單層內(nèi)皮細(xì)胞，中膜薄，由2-3 層血管平滑肌細(xì)胞及少量膠原組成。移植后3d 可見內(nèi)膜受損，有炎性細(xì)胞浸潤。移植后 7d可見內(nèi)膜明顯增生，在14d和28d時，可見內(nèi)膜逐漸增厚，有較多的平滑肌細(xì)胞，血管管腔

5、相對變小。
　　 3、動態(tài)觀察移植后血管PKC-αmRNA、蛋白表達(dá)的變化。
　　 3.1Real-Time PCR 法檢測移植靜脈PKC-αmRNA表達(dá)：在移植后的第3天,mRNA的相對表達(dá)量明顯升高, 約為對照組的（2.335 士0.059）倍, 2組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0. 01)。隨著時間的延長, 其表達(dá)量漸減少。
　　 3.2 Western Blot 法檢測移植靜脈PKC-α蛋白表達(dá)：PKC-α表

6、達(dá)在移植后第3天時明顯增高, 而后漸下降。
　　 3.3 SP免疫組織化學(xué)染色法檢測移植靜脈PKC-α蛋白：表達(dá)陽性細(xì)胞大部分位于增厚的中膜和內(nèi)膜, 增生組織中表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于非增生部分, 且增生細(xì)胞胞質(zhì)中棕黃顆粒也明顯增多。
　　 結(jié)論：
　　 成功建立了兔頸部自體靜脈移植模型；光鏡下觀察到移植后靜脈內(nèi)膜受損、增生，隨著時間的延長，血管管腔相對變?。辉陟o脈移植后的早期, PKC-αmRNA及其蛋白表達(dá)升高