早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中蛋白激酶C與內(nèi)皮素系統(tǒng)、核因子-kB的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　觀察在糖尿病早期階段視網(wǎng)膜內(nèi)蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）活性及各亞型蛋白表達(dá)的情況，并連續(xù)動態(tài)觀察糖尿病早期狀態(tài)下視網(wǎng)膜內(nèi)皮素（endothelin，ET）系統(tǒng)及核因子-Kappa B（nuclear factor-kappa B，NF-kB）的表達(dá)變化。觀察非選擇性PKC抑制劑GF109203X對視網(wǎng)膜內(nèi)ET系統(tǒng)及NF-kB表達(dá)的影響，以探討P KC在糖尿病早期誘導(dǎo)視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷的作用機(jī)制。

2、
　　方法：
　　采用Sprague Dawley（SD）大鼠為實驗對象，使用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）的方法誘導(dǎo)糖尿病大鼠動物模型。酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunoabsorbent assay，ELISA）檢測12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)PKC活性。免疫印跡法（western blottiog，WB）檢測12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)相關(guān)P KC亞型的蛋白表

3、達(dá)情況。實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(quantitative real time-polymerase chain reaction，QRT-PCR）檢測不同病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜ET系統(tǒng)和NF-kB p65 mRNA的表達(dá)情況。對12周病程的糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)注射不同濃度（10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L）的非選擇性PKC抑制劑后，運(yùn)用QRT-PCR檢測ET系統(tǒng)及NF-kB mRNA表達(dá)的變化。

4、>　　結(jié)果：
　　1、12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織內(nèi)細(xì)胞膜組份的 PKC活性較正常對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），細(xì)胞漿組份的PKC活性無明顯變化（P>0.05）。
　　2、12周病程的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中，PKC-α、β1、β2、δ表達(dá)較正常對照組增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中以 PKC-β1、β2最為明顯，PKC-ε無明顯變化（P>0.05）。
　　3、在糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜組織

5、內(nèi)ETs及NF-kB的mRNA表達(dá)均較正常對照組明顯增加，其中ET-1及NF-kB在2周既已出現(xiàn)明顯升高，ET-3及ET-A在第4周檢測出mRNA表達(dá)水平的升高，而ET-B mRNA的升高出現(xiàn)在第12周，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　4、對12周病程的糖尿病大鼠進(jìn)行玻璃體注射10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L的PKC抑制劑后，視網(wǎng)膜內(nèi)ETs及NF-kB p65 mRNA表達(dá)均不同程度的降低，且呈