硫化氫與維持性血液透析合并難治性高血壓關(guān)系的臨床及基礎(chǔ)研究.pdf

1、長(zhǎng)期以來人們一直認(rèn)為硫化氫(hydrogen sulfide，H2S)是一種無色的具有臭雞蛋氣味的氣體，醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)2S的認(rèn)識(shí)主要局限于其毒性作用[1，2]。上世紀(jì)八十年代末年，Goodwin[3]等在牛、鼠和人等哺乳動(dòng)物腦中首次發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性H2S后，人們逐漸認(rèn)識(shí)到H2S可能是體內(nèi)一種重要的調(diào)節(jié)介質(zhì)。隨后，在近二十年的研究中，內(nèi)源性H2S被發(fā)現(xiàn)存在于哺乳動(dòng)物的多種組織器官中，并通過多種調(diào)節(jié)方式和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)形式發(fā)揮不同的生理效應(yīng)，包括調(diào)節(jié)消化

2、道和血管平滑肌張力，影響大腦發(fā)育，調(diào)節(jié)下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素的釋放，抑制由內(nèi)皮素誘導(dǎo)的血管平滑肌增殖效應(yīng)，調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞張力等[4，5]。由于能在體內(nèi)產(chǎn)生，并執(zhí)行多種生理功能，如同一氧化氮(nitric oxide，NO)、一氧化碳(carbon monoxide，CO)一樣，在生物體生理及病理過程中，尤其在高血壓[6，7]、動(dòng)脈粥樣硬化[8]、冠心病[9]等心血管疾病中，發(fā)揮著極為重要的作用，因此，H2S被稱為繼NO和CO

3、后的第三個(gè)氣體信號(hào)分子，目前已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示：在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，血漿H2S和CSE基因表達(dá)明顯低于正常大鼠(WKY)，給予H2S可降低大鼠血壓，緩解高血壓發(fā)展進(jìn)程，而CSE抑制劑則可促進(jìn)高血壓發(fā)生發(fā)展[6]。在CSE基因敲除的大鼠，血漿及組織中H2S水平顯著低于野生型大鼠[10]。另外，H2S可通過開放血管平滑肌KATP通道，促鉀外流，從而舒張血管，降低血壓[11]。
　　 心腦血管疾病是影響血

4、液透析(HD)患者生活質(zhì)量及長(zhǎng)期生存率的重要并發(fā)癥，亦是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年超過50％-60％的HD患者死于心腦血管并發(fā)癥。高血壓是HD患者最為常見的并發(fā)癥，也是導(dǎo)致其它心血管并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的主要原因。近年來國(guó)內(nèi)外就H2S在高血壓等心腦血管疾病中的研究，為明確透析患者心腦血管疾病高發(fā)病率和高死亡率，提供了一個(gè)嶄新的研究方向及可能的治療靶點(diǎn)。
　　 目的:本研究旨在探討：1)H2S在HD患者中的分布特點(diǎn)及影響因素，

5、2)H2S在HD合并難治性高血壓患者中的作用及臨床機(jī)制；3)H2S和NO在尿毒癥毒素合并難治性高血壓患者中的基礎(chǔ)機(jī)制。
　　 方法:本研究設(shè)有臨床研究和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)兩部分。1)臨床研究：根據(jù)篩選及排除標(biāo)準(zhǔn)，納入符合要求的患者。根據(jù)透前血壓及降壓藥使用情況，隨機(jī)抽取血壓正常者(定義為未使用任何降壓藥，透析前血壓達(dá)標(biāo))50例，血壓控制良好者(定義為使用3種及3種以下的降壓藥，透析前血壓控制達(dá)標(biāo))48例，難治性高血壓者52例(定義為使用3

6、種及3種以上的降壓藥，血壓仍不達(dá)標(biāo)，或者使用四種及四種以上的藥物，透析前血壓控制達(dá)標(biāo))，留取透析前、后血標(biāo)本，檢測(cè)血漿H2S、NO、硫化血紅蛋白、硫酸吲哚酚等；2)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：根據(jù)臨床研究結(jié)果，采用IS刺激臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，觀察H2S、NO產(chǎn)生情況；外源性給予H2S，觀察其對(duì)IS刺激下細(xì)胞NO生成情況的影響；應(yīng)用ATP依賴性鉀通道(KATP)阻斷劑格列本脲及P13K/Akt阻斷劑LY294002，進(jìn)一步探討H2S對(duì)細(xì)胞保護(hù)作用

7、的機(jī)制。
　　 結(jié)果:臨床研究顯示：1)與健康對(duì)照組相比，HD患者透析前H2S、硫化血紅蛋白、NO、NO/ET-1均明顯下降(P<0.05)；透析前H2S水平與透析前NO(r，p：0.546，0.000)、N0/ET-1(r，p：0.527，0.000)、硫化血紅蛋白(r，p：0.553，0.000)、eGFR呈正相關(guān)(r，p：0.399，0.001)，與Cr(r，p：-0.439，0000)、IS(r，p：-0.426，0.0

8、00)、SBP(r，p：-0.258，0.027)、PP(r，p：-0.231，0.048)呈負(fù)相關(guān)；透析后H2S水平明顯上升，NO、NO/ET-1呈顯著下降趨勢(shì)；透析前后H2S的差異獨(dú)立于透析期間超濾量，透析后單核細(xì)胞CSE基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。2)難治性高血壓組患者普遍較為年輕，透前H2S、NO、NO/ET-1、硫化血紅蛋白較低，而β2-MG和NT-proBNP明顯較高；多因素多項(xiàng)式Logistic回歸顯示：H2S與難治性高血壓之間的負(fù)

9、性關(guān)系經(jīng)NO、年齡等因素校正后，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義消失(P>0.10)；模型中僅剩NO有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.10)；依次用白蛋白、BMI及IS進(jìn)一步校正后，NO與難治性高血壓的之間關(guān)系的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義亦減弱直至消失(P>0.10)。
　　 基礎(chǔ)研究顯示：1)IS可減少HUVEC NO、H2S生成，抑制eNOS活力，刺激活性氧產(chǎn)生，且作用呈劑量依賴性；2)H2S可改善IS對(duì)HUVEC的損傷，提高HUVECNO的生成，上調(diào)eNOS活力，抑制活性

10、氧產(chǎn)生，且呈倒U型曲線；3)wesern blot顯示：IS刺激下，HUVEC Akt磷酸化水平明顯降低，eNOS蛋白表達(dá)量減少；而低濃度H2S可上調(diào)Akt磷酸化水平及eNOS蛋白表達(dá)量，加用KATP阻斷劑格列本脲及P13K/Akt阻斷劑LY294002后，H2S對(duì)HUVEC的保護(hù)作用可被阻斷。
　　 結(jié)論:維持性HD患者血漿H2S、NO水平明顯降低，兩者下降趨勢(shì)一致，且均與透前IS濃度呈負(fù)相關(guān)；透析后血漿H2S濃度明顯升高，且