美洲黑石斑魚(Centropristis striata)“突眼”癥的病原菌分離鑒定和組織病理學(xué)研究.pdf

1、近年來，養(yǎng)殖中美洲黑石斑魚的“突眼”病癥嚴(yán)重影響著其苗種繁育工作，給其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了巨額經(jīng)濟(jì)損失。本文在探究引發(fā)美洲黑石斑魚(C. striata)患“突眼”癥的相關(guān)病原和其病理學(xué)影響中：運(yùn)用了生理生化和分子生物學(xué)、測(cè)酶活、顯微病理學(xué)、超微病理學(xué)等相關(guān)研究方法。研究結(jié)果如下：
　　1．美洲黑石斑魚“突眼”癥病原菌的分離鑒定：美洲黑石斑魚的“突眼”癥狀表現(xiàn)為：眼球白濁、充血、異常增生。從眼球病灶部位分離純化得到一株優(yōu)勢(shì)菌，在 TCB

2、S培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速，菌落中部隆起、黃色，有黏性，桿狀菌，端生單鞭毛，屬于革蘭氏陰性菌，定名為 CJG01。人工感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)：其對(duì)美洲黑石斑魚有較強(qiáng)的致病性，可引起幼魚眼球突出、脫落。解剖感染組的幼魚發(fā)現(xiàn)：患病幼魚的肝臟、腎臟紅腫、脾臟腫大，腸道內(nèi)有淡黃色液體。其半致死濃度 LD50為2.67×105 CFU/ml。API20NE快速鑒定及相關(guān)生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：菌株CJG01的生長(zhǎng)溫度為28-37℃，最適溫度為28℃，在含鹽量0-5％

3、之間的TSB培養(yǎng)基可生長(zhǎng)，對(duì)弧菌抑制劑O/129敏感，氧化酶反應(yīng)陽性，鳥氨酸脫羧酶反應(yīng)陽性，V-P反應(yīng)陰性，可同化甘露醇、麥芽糖、蘋果酸，不能同化葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、癸酸、已二酸、檸檬酸、苯乙酸等，菌株CJG01的生理生化特性與哈維氏弧菌一致。對(duì)病原菌的16SrDNA序列對(duì)比分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，菌株CJG01與哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)序列同源性最高，達(dá)99%。藥敏實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該菌株對(duì)氨芐西林、頭孢氨芐、頭孢拉

4、定、諾氟沙星、青霉素、阿奇霉素、多粘菌素B，等8種藥物不敏感，對(duì)頭孢唑林、恩諾沙星、鏈霉素、紅霉素、克拉霉素，等4種藥物中度敏感，對(duì)抗生素頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢他啶、氧氟沙星、洛美沙星、氟羅沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、新生霉素、新霉素、慶大霉素、卡那霉素、呋喃唑酮、利福平、四環(huán)素、米諾環(huán)素，等16種藥物敏感。
　　2．哈維氏弧菌CJG01病原株對(duì)美洲黑石斑魚血清生化指標(biāo)的影響：與健康黑石斑魚相比，患病幼魚血清的總蛋白、白蛋白、甘油三

5、酯、總膽固醇、尿素氮的含量顯著降低，肌酐含量顯著增加，球蛋白的含量沒有顯著性差異；患病幼魚血清的乳酸脫氫酶活性的顯著增強(qiáng)，谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、溶菌酶的酶活性均顯著增強(qiáng)；患病幼魚血清的K+含量的顯著降低，Cl-含量顯著增加，Na+、Ca2+的含量沒有顯著性差異。這表明患“突眼”癥的美洲黑石斑魚的，肌肉、肝臟、腎臟等組織器官損傷嚴(yán)重，肝功能、腎功能異常。
　　3．哈維氏弧菌CJG01病原株對(duì)美洲黑石斑魚的顯微病理學(xué)影響

6、：患病幼魚的眼球腫脹，含有囊狀物，晶狀體部位含有凝血塊；肌纖維損傷壞死；心臟肌節(jié)模糊不清，紅細(xì)胞增多；肝中央靜脈擴(kuò)張充血，肝細(xì)胞空泡變性，部分肝細(xì)胞核溶解、消失，大量的淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)于肝細(xì)胞間質(zhì)；脾臟組織壞死，紅細(xì)胞破裂，脾臟充血，淋巴細(xì)胞增多；部分黏膜細(xì)胞脫落、壞死，胃底腺細(xì)胞排列疏松，胃底腺細(xì)胞空泡變性；大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)于腸道黏膜層、黏膜下層，腸絨毛壞死；腎間質(zhì)淤血，大量紅細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球毛細(xì)血管充血，腎小管管壁細(xì)

7、胞空泡變性、壞死，細(xì)胞核溶解、消失；鰓組織的病理變化不顯著。
　　4．哈維氏弧菌CJG01病原株對(duì)美洲黑石斑魚的超微病理學(xué)影響：患病幼魚的神經(jīng)突觸間質(zhì)充血，角膜的成纖維細(xì)胞壞死，膠原蛋白溶解。肌原纖維超微結(jié)構(gòu)， H帶模糊，M線模糊，肌原纖維斷裂，線粒體數(shù)量減少，部分線粒體解體。心肌纖維的H帶不清楚，M線不清楚，I帶不清楚，Z線不清楚，肌原纖維斷裂。肝細(xì)胞腫大、變形，一些肝細(xì)胞核被擠壓，偏離細(xì)胞中心。細(xì)胞核膜界限模糊，胞質(zhì)內(nèi)的線粒體

8、數(shù)量含量降低，部分線粒體解體。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)斷裂，空泡化嚴(yán)重，脂滴充滿整個(gè)肝細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞器溶解、彌散于細(xì)胞核周圍，溶酶體增多，部分肝臟細(xì)胞壞死、凋亡。脾臟組織的淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，淋巴細(xì)胞溶解死亡，細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞器崩解，核膜破壞。患病幼魚胃組織的細(xì)胞界限模糊，核膜破壞，細(xì)胞核濃縮，細(xì)胞器溶解。腸上皮細(xì)胞細(xì)胞界限模糊，細(xì)胞空泡化嚴(yán)重。腎上皮細(xì)胞部分壞死，細(xì)胞核溶解，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)溶酶體含量增多，幼魚第一近曲小管，內(nèi)皮細(xì)胞壞死，細(xì)胞界限模糊，絨毛脫