基因槍接種HBsDNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機(jī)理及促進(jìn)其向Th1型轉(zhuǎn)換的研究.pdf

1、該課題以乙肝表面抗原(HBsAg)為靶抗原,對(duì)基因槍皮膚接種HBs DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機(jī)理進(jìn)行探討,并試圖尋找能促使其向Th1型轉(zhuǎn)換的佐劑策略.DNA疫苗以基因槍和注射器接種可能在以下幾方面存在差異,包括接種劑量、質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染機(jī)制、局部抗原遞呈細(xì)胞(APC)的種類、抗原加工呈遞的過(guò)程等.鑒于APC(特別是樹(shù)突狀細(xì)胞)的活化對(duì)免疫應(yīng)答的誘生及性質(zhì)有重要影響,推測(cè)基因槍與注射器接種對(duì)APC產(chǎn)生不同"危險(xiǎn)信號(hào)"(在基因槍由金

2、顆粒轟擊造成,在注射器接種則為質(zhì)粒DNA中所含的CpG motif)可能是誘生不同類型免疫應(yīng)答的關(guān)鍵.為驗(yàn)證此"危險(xiǎn)信號(hào)"假說(shuō),該研究首先對(duì)基因槍皮膚接種與注射器肌注接種后BALB/c小鼠的局部組織作H&E染色觀察,結(jié)果表明基因槍接種轟擊金顆粒與注射器肌注接種CpG motif均可在局部誘發(fā)炎癥,證實(shí)二者均為可激活機(jī)體天然免疫反應(yīng)的"危險(xiǎn)刺激".為探討兩種"危險(xiǎn)刺激"對(duì)免疫應(yīng)答類型影響的可能機(jī)制,對(duì)BALB/c小鼠分別以基因槍皮膚接種質(zhì)

3、粒DNA+金顆粒、單獨(dú)金顆?；駽pG-ODN+金顆粒,注射器肌注接種質(zhì)粒DNA、CpG-ODN或GC-ODN,接種3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)與48小時(shí)后分離引流淋巴結(jié)細(xì)胞,體外培養(yǎng)加ConA刺激,進(jìn)而以RT Real-Time PCR方法檢測(cè)各組細(xì)胞釋放IFN-γ、IL-12、IL-10或IL-4的水平.為克服基因槍接種DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答為主的缺點(diǎn),該研究進(jìn)一步對(duì)可能促使基因槍接種HBs DNA疫苗誘生的Th2型免疫

4、應(yīng)答向Th1型轉(zhuǎn)換的佐劑策略進(jìn)行了探討.已知CpG motif能激活TLR9信號(hào)通路而促進(jìn)Th1型免疫,基于用基因槍轟擊金顆粒+CpG-ODN能使引流淋巴結(jié)細(xì)胞因子微環(huán)境轉(zhuǎn)化為T(mén)h1型的結(jié)果(該研究第一部分),推測(cè)在基因槍接種HBs DNA疫苗的同時(shí)共導(dǎo)入一定量的CpG-ODN有可能克服其Th2型的偏性.根據(jù)單鏈RNA能激活TLR7或TLR8信號(hào)通路而促進(jìn)Th1型免疫以及HBcAg誘生Th1型免疫應(yīng)答的能力與其C末端結(jié)合RNA的性能有關(guān)

5、的研究報(bào)道,該研究進(jìn)一步對(duì)HBcAg結(jié)合RNA的特性作為一種Th1佐劑策略的可能性進(jìn)行了分析.通過(guò)上述研究,該文驗(yàn)證了基因槍轟擊金顆粒可造成一種Th2偏性"危險(xiǎn)性號(hào)"的假設(shè),并證實(shí)提高CpG moitif數(shù)量可使其向Th1型轉(zhuǎn)換,部分解釋了基因槍接種HBs DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機(jī)制,并為應(yīng)用CpG motif促使其向Th1型轉(zhuǎn)換提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù);提出并用實(shí)驗(yàn)證明在基因槍接種HBs DNA疫苗的同時(shí)共導(dǎo)入一定量的CpG-ODN或