核心蛋白聚糖抑制淋巴細胞增殖及皮膚移植免疫排斥反應的研究.pdf

1、器官移植是目前終末期器官功能衰竭患者的唯一根治性治療手段。移植術(shù)后患者必須常規(guī)接受免疫抑制劑治療，免疫抑制藥物的應用能夠降低急性排斥反應發(fā)生，免疫抑制劑的發(fā)展推動了器官移植向前發(fā)展。經(jīng)過半個多世紀的歷程，免疫抑制劑在器官移植領(lǐng)域取得了顯著成就，在人類科學發(fā)展史上邁出了巨大的一步。20世紀60年代臨床可用免疫抑制劑十分有限，只有皮質(zhì)激素及硫唑嘌呤。到70年代出現(xiàn)了抗淋巴細胞球蛋白(多克隆抗體)。80年代初環(huán)孢素問世，90年代嗎替麥考酚酯及

2、他克莫司相繼應用于臨床，近年來多個新型免疫抑制劑不斷進入臨床并能有效控制器官移植免疫排斥反應發(fā)生。雖然這些新型免疫抑制劑雖然在肝、腎毒性、神經(jīng)毒性和胃腸道毒性等方面有了很大改善，但是免疫抑制藥物仍存在一些不同不良反應及不盡人意之處，我國是肝癌大國，肝癌病人多，部分病人需要接受肝移植手術(shù)，肝癌肝移植術(shù)后應用免疫抑制劑，降低免疫排斥反應同時可能會誘發(fā)肝癌復發(fā)和感染。解決以上這些問題是器官移植界當務之急若能尋找一種新型免疫抑制劑，克服以上不良

3、反應及不足，將給醫(yī)生及患者帶來福音。雷帕霉素和索拉非尼經(jīng)證實具有抗腫瘤和抗免疫排斥雙重作用。核心蛋白聚糖（decorin,DCN）研究已表明具有抗腫瘤作用，本實驗欲證實DCN是否具有抗免疫排斥作用。
　　核心蛋白聚糖（DCN）是細胞外基質(zhì)的重要組分之一，具有多種生物活性。其已被大量體外研究證實能夠抑制多種腫瘤細胞的增殖。其抑制腫瘤細胞的機制主要有：①DCN可以作用影響細胞周期，使G1期細胞數(shù)增加而S期細胞數(shù)顯著降低，起到抑制腫瘤細

4、胞增殖作用。②抑制TGF-β生物活性，減少腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移。③DCN可以誘導腫瘤細胞凋亡。我們既往研究證實DCN具有抗肝癌作用，其機制主要是調(diào)節(jié)肝癌細胞周期，促進細胞凋亡，抑制肝癌細胞的增殖。DCN在免疫排斥方面文獻報道較少，MarkStegall[1]研究報道，大鼠心臟移植術(shù)，測受體鼠術(shù)后3d、5d、7d體內(nèi)DCN含量變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn):同種異體移植組大鼠體內(nèi)DCN隨時間延長DCN含量降低，急性排斥反應明顯，而同種同基因大鼠體內(nèi)DCN含量則

5、無明顯變化。這一研究表明，DCN可能與免疫排斥反應有關(guān)。
　　目的：觀察DCN對小鼠脾臟淋巴細胞體外增殖影響；DCN作用于受體小鼠體內(nèi)Th1和Th2細胞因子變化；DCN對皮膚移植模型術(shù)后免疫排斥反應的影響。
　　方法：以Ficoll密度梯度離心法提取C57BL/6J脾臟淋巴細胞，96孔板接種后，各孔加入25μg刀豆蛋白A。將細胞分為5組，分別加入0、25、50、75、100μg/L的DCN，同時設(shè)立僅含細胞懸液陰性對照組和培

6、養(yǎng)液空白對照組。各組細胞培養(yǎng)24、48、72、96、120h后，以MTT法檢測各組淋巴細胞增殖率，并以流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率。以24只健康成年BALB/c小鼠為供體，30只健康成年C57BL/6J小鼠為受體，將受體隨機分為5組，建立背部皮膚移植模型。A組為陰性對照組，術(shù)后腹腔注射生理鹽水1mL；B組、C組、D組受體小鼠于術(shù)后分別腹腔注射50、100、150μg的DCN。同時設(shè)立E組，為C57BL/6J對C57BL/6J的同種同基因

7、移植對照組。移植術(shù)后第7天ELISA方法檢測外周血Th1和Th2細胞因子含量變化，重復以上建立移植模型步驟，建立相同組別小鼠皮膚移植模型，術(shù)后腹腔給予同樣DCN，觀察各組受體移植皮片的存活時間和急性排斥反應發(fā)生時間。術(shù)后第7天，每組各取1只受體小鼠的移植皮片行病理學檢查。
　　結(jié)果：各組不同濃度DCN對小鼠脾臟淋巴細胞體外增殖均有抑制作用，并可誘導淋巴細胞凋亡，隨DCN濃度升高對淋巴細胞增殖抑制作用更強，100μg/L組抑制作用最

8、明顯，細胞凋亡率為77.6％，與其他各組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)；術(shù)后7天檢測受體內(nèi)細胞因子，結(jié)果如下：Th1細胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α含量在A、B、C、D、E組依次呈下降趨勢，生理鹽水A組細胞因子含量最高，如IL-2（45.1±1.8pg/L），同種同基因移植E組含量最低，如IL-2（15.4±1.7pg/L）,而TH2細胞因子IL-4、IL-10含量在A、B、C、D、E組依次呈上升趨勢，生理鹽水A組含量最低

9、，如IL-4（60.9±2.6pg/L），同種同基因移植E組含量最高，如IL-4（88.3±1.4pg/L）但各組IL-6含量未見明顯變化。經(jīng)方差分析，IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4和IL-10細胞因子不同組別間存在統(tǒng)計學意義（P<0.05）而IL-6不同組別間無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。術(shù)后14天檢測上述細胞因子，各組IL-6細胞因子含量無明顯變化，A、B和E組細胞因子也無明顯變化，而C、D組中IL-2、IFN-γ、TN

10、F-α較術(shù)后7天相對應組別細胞因子含量升高，而IL-4、IL-10卻是降低的，經(jīng)方差分析，同一組別術(shù)后7天和術(shù)后14天受體體內(nèi)細胞因子含量存在統(tǒng)計學意義（P<0.05）。DCN具有抑制皮膚移植免疫排斥反應及延長移植皮片存活時間，150μg組皮片存活時間最長，平均為（16.6±2.4）天，與其他各組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。且隨劑量增大抑制作用明顯，移植皮膚急性排斥反應輕。
　　結(jié)論：DCN具有抑制淋巴細胞增殖作用，可能