基于糖組學(xué)的核心蛋白聚糖的糖胺聚糖結(jié)構(gòu)序列研究.pdf

1、曼，澎爐z角矢乎博士學(xué)位論文論文題目：基于糖組學(xué)的核心蛋白聚糖的糖胺聚糖結(jié)構(gòu)序列研究合作導(dǎo)師：ProfRobertJLinhardt提交日期：2018年1月基于糖組學(xué)的核心蛋白聚糖的糖胺聚糖結(jié)構(gòu)序列研究摘要糖組學(xué)代表組學(xué)研究的最前沿，也最具挑戰(zhàn)性。目前，糖組學(xué)的發(fā)展未跟上快速發(fā)展的基因組學(xué)和蛋白組學(xué)研究的腳步，主要原因是糖鏈結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性及缺乏有效的鑒定糖序列的分析方法。糖基化通常發(fā)生在高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，根據(jù)基因組學(xué)和蛋白組學(xué)方法，不能研

2、究透徹或預(yù)測(cè)糖基化過(guò)程。蛋白聚糖(proteoglycans，PGs)及其側(cè)鏈上的糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAGs)是其中一種結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的糖復(fù)合物。2011年Nature子刊NatureChemicalBiology首次發(fā)表蛋白聚糖雙庫(kù)尼茨抑制劑(bikunin)的糖胺聚糖全序列結(jié)構(gòu)，也是迄今唯一結(jié)構(gòu)鑒定的糖胺聚糖，本文在此基礎(chǔ)上研究結(jié)構(gòu)更復(fù)雜的蛋白聚糖核心蛋白聚糖(decorin)的糖胺聚糖全序列結(jié)構(gòu)。核心蛋白

3、聚糖從來(lái)源豐富的豬皮中通過(guò)檸檬酸鈉提取，利用非特異性蛋白酶actinaseE完全酶解蛋白質(zhì)，通過(guò)D一消除反應(yīng)除去還原性末端殘留的氨基酸殘基，得到糖胺聚糖。應(yīng)用一系列分析方法包括聚丙烯酰胺凝膠電泳，凝膠滲透色譜，核磁共振和高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜鑒定提取的糖胺聚糖純度和初級(jí)結(jié)構(gòu)，并測(cè)定其體外抗凝血活性。結(jié)果顯示decorin糖胺聚糖平均分子量為22kDa，鏈長(zhǎng)范圍為聚合度dpl4一dp290，平均聚合度為dp92，平均每個(gè)二糖重復(fù)單元(己糖