三七凝膠對硬膜外瘢痕粘連的病理形態(tài)及相關(guān)細胞因子影響的實驗研究.pdf

1、脊柱外科術(shù)后造成的椎板缺損區(qū)是通過纖維結(jié)締組織增生來修復(fù)，整個過程經(jīng)歷了早期的炎癥反應(yīng)、肉芽組織增生、纖維化、瘢痕組織形成及重塑等基本病理生理過程，其基礎(chǔ)是早期炎性細胞的病理生理活動。早期的病理反應(yīng)對瘢痕的形成有重要作用。硬膜外瘢痕組織增生與硬膜囊瘢痕粘連的形成是引起術(shù)后神經(jīng)根刺激癥狀纏綿難愈的重要原因之一，嚴重影響脊柱外科手術(shù)的治療效果和患者的生活質(zhì)量。國內(nèi)外學(xué)者在基礎(chǔ)和臨床研究中進行了人量關(guān)于硬膜外瘢痕粘連形成原因、預(yù)防材料及方法研

2、究，取得了一定的進展，但仍存在防止粘連不完全、降解過快、生物相容性差等問題，有肯定效果、廣泛應(yīng)用于臨床的材料和方法并沒有。前期實驗研究初步證實半流態(tài)的由活血止血特性的中藥三七和卡波姆凝膠共同組成的三七凝膠在局部植入，不但起到三維立體的物理+化學(xué)遮擋作用預(yù)防硬膜外瘢痕粘連的形成，而且由于凝膠的特殊性狀，使三七在局部緩慢釋放，持續(xù)發(fā)揮藥效，減少瘢痕組織的形成，軟化瘢痕等作用。本實驗旨在通過對三七凝膠預(yù)防椎板減壓術(shù)后大鼠硬膜外瘢痕粘連的作用及

3、相關(guān)機制的探討，從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的角度為中醫(yī)藥預(yù)防硬膜外瘢痕粘連提供更為科學(xué)的理論和實驗依據(jù)。 1.實驗一,三七凝膠預(yù)防大鼠硬膜外瘢痕粘連的病理形態(tài)觀察1．1實驗?zāi)康挠^察三七凝膠對大鼠硬膜外瘢痕粘連的病理形態(tài)改變和膠原纖維增生情況。 1．2實驗方法1．2．1分組、造模干預(yù)72只♂ SD大鼠，平均體重380±20g，隨機分為生理鹽水組、凝膠組、粘連平組、三七凝膠組，每組18只大鼠；制作L3椎板切除模型，暴露硬膜囊；根據(jù)分組情況在

4、硬膜外椎板缺損區(qū)分別給予如下處理：生理鹽水、1％凝膠、粘連平、三七凝膠；各組按照實驗設(shè)計要求分別在術(shù)后7天、14天、21天取材，各組每時間點取6只大鼠。 1．2．2標(biāo)本處理按照常規(guī)要求制作標(biāo)本、切片，行HE染色和經(jīng)典Masson染色。 1．2．3觀察項目及分析①常規(guī)觀察椎板缺損區(qū)硬膜外組織的病理形態(tài)改變；②計算機自動圖像分析綠染的膠原纖維的面密度百分比(目標(biāo)面積/統(tǒng)計場面積×100％)；③硬膜外粘連程度He-Revel評

5、分。 2.實驗二,三七凝膠對大鼠硬膜外瘢痕粘連相關(guān)細胞因子影響的研究2．1實驗?zāi)康挠^察三七凝膠對大鼠硬膜外瘢痕粘連組織中COX-2、TGF-β<,1>、TIMP-1和MMP-1表達的影響，研究三七凝膠在控制硬膜外組織炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)細胞增殖和膠原代謝等方面的作用，初步探討三七凝膠預(yù)防大鼠硬膜外瘢痕粘連的相關(guān)機制。 2．2實驗方法2．2．1實驗動物模型制備、分組、’干預(yù)措施、取材、切片同實驗一。 2．2．2檢測項目及

6、分析免疫組化S-P法檢測標(biāo)本組織中的COX-2、TGF-β<,1>、TIMP-1和MMP-1，應(yīng)用計算機自動圖像分析系統(tǒng)進行定量分析，對COX-2、TGF-β<,1>、TIMP-1和MMP-1的陽性表達細胞進行計數(shù)和MOD值(平均光密度值)測定。 3結(jié)論 3．1三七凝膠是由止血活血中藥三七濃縮液和卡波姆凝膠共同組成的凝膠制劑，生物相容性好，對動物無刺激作用。 3．2三七凝膠可以有效抑制大鼠硬膜外瘢痕的形成及與硬膜

7、囊的粘連，三七是其有效成分。單純凝膠對硬膜外纖維性瘢痕的形成及與硬膜囊的粘連并沒有影響。 3．3三七凝膠通過抑制大鼠椎板缺損區(qū)局部COX-2的表達可以明顯減輕椎板減壓術(shù)對大鼠傷口組織局部的炎癥反應(yīng)；同時三七凝膠能減少早期硬膜外血腫。 3．4三七凝膠在術(shù)后肉芽增牛期沒有破壞MMP-1/TIMP-1的動態(tài)平衡，不會延緩傷口的早期愈合。 3．5三七凝膠在術(shù)后組織修復(fù)期可能通過抑制硬膜外組織中TGF-β<,1>的表達減少