多巴脫羧酶在胃癌腹腔沖洗液中的表達(dá)及其與胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的關(guān)系.pdf

1、前言： 胃癌是源自胃粘膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，主要治療手段是胃癌根治術(shù)，術(shù)后5年生存率為大概為32％～40％，其中約30％～50％的患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移，是導(dǎo)致患者死亡的重要原因[1]。胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的過(guò)程為：癌細(xì)胞浸透胃漿膜，向腹腔脫落，在腹腔內(nèi)環(huán)境作用下形成有生物活性的脫落癌細(xì)胞，進(jìn)而與腹膜粘附著床，增殖形成癌結(jié)節(jié)。 胃癌細(xì)胞脫落入腹腔后，其在腹腔內(nèi)的生物學(xué)活動(dòng)導(dǎo)致許多特異性分子的產(chǎn)生。通過(guò)檢測(cè)這些特異性分子，不僅幫助我們分

2、析闡明胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)機(jī)制，還能作為腹膜轉(zhuǎn)移特異性標(biāo)志物提示腹腔中脫落腫瘤細(xì)胞和微轉(zhuǎn)移灶的存在，進(jìn)而幫助臨床采取有效的阻斷治療。目前這方面的研究對(duì)象主要集中在腫瘤細(xì)胞相關(guān)抗原、細(xì)胞外基質(zhì)及相應(yīng)的降解酶類(lèi)、粘附分子與細(xì)胞因子等。 以往一些研究表明，多巴脫羧酶[39](dopa decarboxylase，DDC)是胃癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要因子。本研究用RT-PCR檢測(cè)92例胃癌腹腔沖洗液中DDC mRNA的表達(dá)，探討DDC

3、與胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的關(guān)系，分析其在腹膜轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用，并為今后胃癌的基因治療以及預(yù)防轉(zhuǎn)移提供新的靶點(diǎn)。 材料與方法： 1、標(biāo)本采集 選取中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科2005～2006年間胃癌患者的腹腔沖洗液標(biāo)本92例。腹腔液標(biāo)本靜置5分鐘后，以2000r/min離心10min，取部分沉渣HE染色、細(xì)胞學(xué)檢查；其余沉渣深低溫冰箱凍存，用于提取總RNA。胃癌原發(fā)病灶的侵襲深度、漿膜類(lèi)型、大體類(lèi)型、生長(zhǎng)方式等臨床病理

4、因素按13版日本胃癌病理規(guī)約標(biāo)準(zhǔn)判定。 2、 提取腹腔沖洗液總RNA TRIZOL法提取胃癌腹腔沖洗液沉渣標(biāo)本中的總RNA。取少量RNA用于含量及純度測(cè)定，其余分裝后置-70℃保存。 3、RT-PCR擴(kuò)增各個(gè)分子mRNA (1)cDNA第一鏈合成用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈。 (2)PCR擴(kuò)增各個(gè)指標(biāo)cDNA引物序列利用Primer 3.0軟件設(shè)計(jì)，β-actin做內(nèi)對(duì)照。

5、 (3) 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物，用安萊圖像分析儀掃描和Chemilmager5500軟件分析半定量。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用軟件SPSS 11.5分析，選用X2檢驗(yàn)和方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 1、RT-PCR結(jié)果 92例胃癌腹腔沖洗液中，有57例檢測(cè)到DDC mRNA，陽(yáng)性率為62.0％，表達(dá)相對(duì)值為0.758+0.094。而10例良性疾病腹腔沖洗液中均未檢測(cè)到DDC mRNA的表達(dá)。

6、 2、DDC mRNA的表達(dá)與胃癌腹膜轉(zhuǎn)移相關(guān)臨床病理因素比較 通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析可見(jiàn)，胃癌腹腔液中DDC基因的表達(dá)相對(duì)值隨著腫瘤浸潤(rùn)深度的加深而顯著增加，亦隨著漿膜類(lèi)型的惡變而顯著增加(P<0.05)；另外，DDC的表達(dá)相對(duì)值還與PLC檢查結(jié)果及是否存在肉眼腹膜轉(zhuǎn)移灶有關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論： DDC與胃癌腹膜轉(zhuǎn)移是密切相關(guān)的，通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)胃癌腹腔沖洗液中的DDC mRNA可以用于胃癌腹膜轉(zhuǎn)移