TET2在胃癌的表達(dá)與胃癌轉(zhuǎn)移、預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景：
　　DNA胞嘧啶甲基化是指基因組特定區(qū)域生成5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5-mC)，是一種重要的表觀遺傳學(xué)修飾方式，在生物發(fā)育、基因組印跡和基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。5-mC可經(jīng)TET(Ten-eleven translocation)蛋白家族羥化后生成5-羥甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine，5-hmC)，啟動DNA去甲基化過程。TET蛋白家族有3位成員，分別是TE

2、T1、TET2和TET3。TET蛋白氧化5-mC生成5-hmC，后者進(jìn)一步被轉(zhuǎn)化為5-甲酰胞嘧啶（5-formylcytosine，5-fC）和（或）5-羥基胞嘧啶(5-carboxylcytosine，5-caC)。遺傳學(xué)研究表明TET蛋白家族成員通過修飾DNA去甲基化，在基因組DNA主動去甲基化過程中發(fā)揮重要作用。因此，TET蛋白家族參與生物生長發(fā)育，與多種疾病發(fā)生有密切關(guān)系。近年來，隨著對TET蛋白家族和5-hmC生物學(xué)功能的深入

3、認(rèn)識，TET蛋白家族在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用亦受到重視。
　　胃癌起源于胃黏膜上皮，是危害人類健康的常見惡性腫瘤之一。胃癌的發(fā)生是一個多因素、多步驟的過程。胃癌發(fā)生與環(huán)境和飲食因素、幽門螺旋桿菌感染、遺傳因素等相關(guān)。近年來，胃癌發(fā)生過程中表觀遺傳學(xué)修飾所扮演的角色成為科研工作者研究的重點(diǎn)方向。雖然早有文獻(xiàn)表明，基因轉(zhuǎn)錄可以被異常甲基化作用，從而促進(jìn)基因突變，增加染色體結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性等多重機(jī)制促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展，但是TET蛋白家族在胃

4、癌發(fā)生發(fā)展中的全面和確切的作用仍不清楚。本研究檢測TET蛋白家族成員在胃癌組織中的表達(dá)，探討其與胃癌進(jìn)展的相關(guān)性，為進(jìn)一步認(rèn)識異常表觀遺傳事件促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制奠定了初步基礎(chǔ)。
　　研究目的：
　　檢測TET蛋白家族在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與分化程度、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等胃癌臨床病理特征的關(guān)系，以及胃癌組織TET表達(dá)水平與患者預(yù)后的相關(guān)性。進(jìn)一步檢測胃癌組織E-鈣黏蛋白(E-cadherin)

5、表達(dá)量，分析TET2與E-cad表達(dá)水平的相關(guān)性，探討TET2是否與胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)，為胃癌的分子靶向治療和預(yù)后評估提供新的思路。
　　研究方法：
　　實(shí)驗(yàn)分組:胃癌組織及胃癌癌旁組織兩組。
　　實(shí)驗(yàn)步驟: HE染色再次明確石蠟標(biāo)本胃癌診斷后，腫瘤及部分癌旁區(qū)域制備組織芯片。運(yùn)用免疫組化技術(shù)，檢測上述組織中TET蛋白家族和E-cad的表達(dá)情況，由兩位病理醫(yī)師根據(jù)免疫組化積分打分法(Immnohistochemical se

6、mi-quantitativeRemmele scoring system，IRS)對染色結(jié)果分別進(jìn)行評分，即:免疫組化染色的評分同時(shí)考慮免疫反應(yīng)染色強(qiáng)度(staining intensity，SI)和陽性細(xì)胞百分比(positive percent，PP)。SI分值:0分為未見陽性細(xì)胞，1分為細(xì)胞陽性染色最強(qiáng)處呈現(xiàn)弱陽性，2分為陽性，3分為可見強(qiáng)陽性染色的細(xì)胞;PP分為5級:0分為無染色陽性區(qū)域，1分為陽性染色區(qū)域≤10％，2分為陽性

7、區(qū)域介于11％～50％，3分51％～80％，當(dāng)陽性染色區(qū)域＞80％時(shí)為4分。IHC得分=SI×PP。最后按得分將結(jié)果區(qū)分為高表達(dá)與低表達(dá)兩組:低表達(dá)即0≤積分≤4分，評分＞4分為高表達(dá)。
　　對本組胃癌患者進(jìn)行術(shù)后隨訪，獲取患者基本資料、相關(guān)臨床治療方案及預(yù)后信息。分析TET蛋白家族、E-cad表達(dá)量與胃癌患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，探討TET2與E-cad表達(dá)的相關(guān)性。
　　研究結(jié)果：
　　1.獲取胃癌癌旁組織29

8、例及胃癌組織100例。免疫組化檢測TET蛋白家族表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)TET蛋白家族在胃癌中的表達(dá)相較于癌旁組織表達(dá)下降（均P＜0.05）。
　　2.TET1蛋白表達(dá)與胃癌分化、TNM分期有關(guān)（均P＜0.05）;TET2表達(dá)與腫瘤的直徑、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(p＜0.05);TET3在胃癌組織中的表達(dá)僅與患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。
　　3.TET1和TET3蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌患者預(yù)后無關(guān)（

9、均P＞0.05）;TET2蛋白的表達(dá)與胃癌預(yù)后相關(guān)(P＜0.05)，TET2高表達(dá)的患者總生存期長于TET2低表達(dá)(P＜0.05)。
　　4.相較于胃癌癌旁組織，E-cad在胃癌中的表達(dá)下降，其表達(dá)與胃癌分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(p＜0.05)。
　　5.分析TET2、E-cad與無轉(zhuǎn)移生存時(shí)間的關(guān)系，TET2蛋白、E-cad低表達(dá)患者無轉(zhuǎn)移生存時(shí)間短于其高表達(dá)的患者。其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

10、　　6.胃癌組織中TET2與E-cad表達(dá)呈顯著的正相關(guān)性(p＜0.01)。TET2高表達(dá)的病例中，有65.4％的組織E-cad也呈高表達(dá);TET2低表達(dá)的病例中，有90.5％的患者E-cad低表達(dá)。
　　研究結(jié)論：
　　1、相較于胃癌癌旁組織，TET蛋白家族在胃癌組織中表達(dá)降低，Tet的表達(dá)與胃癌臨床病理特征密切相關(guān)，提示TET蛋白家族參與胃癌演進(jìn);
　　2、TET2在胃癌中高表達(dá)患者的生存率高于低表達(dá)患者，提示Te