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文檔簡介
1、本實(shí)驗(yàn)在研究兔下頜牽張成骨過程中BMP-2和bFGF的時(shí)空表達(dá)的基礎(chǔ)上,應(yīng)用外源性rhBMP-2和rbFGF定量緩釋來促進(jìn)牽張成骨中新骨的成骨速度和質(zhì)量。 第一部分:通過免疫組織化學(xué)方法觀察BMP-2、bFGF在兔下頜骨牽張成骨中的時(shí)空表達(dá)。 研究材料與方法:將12只新西蘭大白兔分為牽張成骨組和部分下頜骨缺損組。其中牽張成骨組8只,部分下頜骨缺損組4只,實(shí)驗(yàn)組安置口外牽張器,經(jīng)7天間歇期后,按0.5mm/12h的速率延長
2、下頜骨6mm。在牽張期第1天、第6天、固定期第7天和第28天分別處死牽張成骨組動(dòng)物2只和部分骨缺損組動(dòng)物1只,取牽張區(qū)及骨缺損區(qū)骨痂用免疫組化方法檢測不同時(shí)間內(nèi)BMP-2、bFGF表達(dá)水平的變化。 研究結(jié)果:下頜骨牽張后BMP-2和bFGF表達(dá)增強(qiáng),其陽性信號主要定位于間充質(zhì)細(xì)胞和新生骨小梁邊緣的成骨細(xì)胞。結(jié)果表明BMP-2和bFGF的陽性信號在牽張期和固定期早期較間歇期和固定期后期表達(dá)更強(qiáng)烈。 研究結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在
3、牽張成骨中bFGF和BMP-2是局部調(diào)整的角色。壓力刺激成骨細(xì)胞和其他類型細(xì)胞分泌bFGF和BMP-2。這兩種因子在牽張期及固定期早期起重要作用,能誘導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞。 第二部分:采用溶劑揮發(fā)法制備rbFGF/PLGA植入片,探討rbFGF/PLGA植入片定量緩釋情況及其對兔下頜牽張成骨促進(jìn)成骨的作用。 研究材料與方法:18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為兩組,每組9只,建立兔下頜雙側(cè)牽張成骨動(dòng)物模型。通過溶劑揮發(fā)法制備
4、rbFGF/PLGA植入片,并植入實(shí)驗(yàn)組,對照組植入空白PLGA。所有動(dòng)物采用標(biāo)準(zhǔn)的牽張方式(間歇期7天,牽張速率0.5mm/12h,共牽張6天),在固定期第1周、第3周、第6周分別處死兩組動(dòng)物各3只,取材,對標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)、影像學(xué)、生物力學(xué)檢查,并進(jìn)行ALP活性測定及骨鈣素含量測定評估新生骨質(zhì)量。 研究結(jié)果:rbFGF/PLGA植入片表面光滑圓整,均勻度好,體外具有定量緩釋作用。兔下頜骨延長后牽張間隙均有新骨形成,實(shí)驗(yàn)組新生骨
5、組織比對照組更為成熟,新生骨形成速度和骨小梁密度均優(yōu)于對照組。 研究結(jié)論:rbFGF/PLGA植入片制備工藝良好,植入片中rbFGF生物活性保存良好,體外具有定量緩釋作用,能明顯促進(jìn)兔下頜牽張成骨質(zhì)量。 第三部分:制備可以定量緩釋的rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯納米微粒緩釋劑,考察其一般性質(zhì)和體外釋藥特性。研究局部使用緩釋rhBMP-2納米微粒對兔下頜牽張成骨中促進(jìn)成骨的作用。 研究材料與方法:采用乳化溶液聚合
6、法制備rhBMP-2納米微粒,18只新西蘭大白兔隨機(jī)分為兩組,每組9只,建立兔下頜雙側(cè)牽張成骨動(dòng)物模型。以0.5mm/12h的速率牽張共延長兔下頜骨6mm。于牽張期開始連續(xù)10天于牽張間隙注射rhBMP-2納米微粒,對照組分別注射等量不含rhBMP-2聚氰基丙烯酸正丁酯乳液。固定期第1周,第3周,第6周分別處死兩組動(dòng)物各3只,檢測血清骨鈣素含量和ALP活性,取材后進(jìn)行影像學(xué)、組織形態(tài)學(xué)觀察,取下頜新骨進(jìn)行生物力學(xué)和骨礦物密度(BMD)檢
7、測。 研究結(jié)果:電鏡觀察表明rhBMP-2納米微粒形態(tài)規(guī)整,rhBMP-2的包封率為78%,體外緩釋試驗(yàn)表明納米微粒中rhBMP-2至少可以維持十天以上。應(yīng)用rhBMP-2納米微粒組的新骨形成速度、質(zhì)量及骨小梁的密度均高于對照組。 研究結(jié)論:采用聚氰基丙烯酸正丁酯制得rhBMP-2納米微粒具有確定的緩釋作用,能夠有效維持rhBMP-2濃度,在體內(nèi)外可以延長rhBMP-2的作用時(shí)間,可作為注射性骨誘導(dǎo)制劑。局部應(yīng)用rhBM
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