炎癥因子及外膜炎癥反應與移植血管動脈硬化早期發(fā)病關(guān)系的實驗研究.pdf

1、目的：近年來，心臟移植已經(jīng)成為治療終末期心臟病的有效方法。由于免疫抑制藥物、器官保存及手術(shù)方法的改進，使得心臟移植病人的短期及長期效果都得到明顯改善。移植物動脈硬化是限制心臟移植病人長期存活的主要因素，也是各種移植器官晚期失功的主要原因。其表現(xiàn)為嚴重的、彌漫性的血管內(nèi)膜增生，血管腔逐漸狹窄，最終導致移植器官缺血性功能衰竭，因此移植物動脈硬化是近年來人們研究的熱點。研究移植物動脈硬化的動物模型有多種，多數(shù)采用顯微外科縫合技術(shù)進行模型制作，

2、需要精巧的顯微外科技術(shù)，且容易產(chǎn)生吻合口出血及狹窄，技術(shù)問題限制了這些模型的廣泛應用。移植物動脈硬化的基本病理改變?yōu)槭紫乳_始于末梢小血管，最終累及整個心肌內(nèi)和心外膜的全部動脈，產(chǎn)生彌漫性、向心性內(nèi)膜肥厚，最后血管閉鎖。其確切發(fā)病機制尚未闡明，可能是一個由免疫因素及非免疫因素均參與的病理生理過程。近年來，炎癥反應尤其是外膜炎癥在動脈硬化的發(fā)病中引起較廣泛的關(guān)注，部分學者認為外膜炎癥反應在動脈硬化的發(fā)病中起到一定作用。本研究的目的是采用袖套

3、管法建立大鼠胸主動脈腹腔移植慢性排斥反應模型，利用該模型研究血清炎癥因子及外膜炎癥反應在移植物動脈硬化早期發(fā)病中的作用。 方法：采用近交系SD大鼠及Wistar大鼠，體重130～150g者為供體，體重250～350g者為受體，隨機分為兩組：異系(SD-Wistar)移植實驗組，同系(Wistar-Wistar)移植對照組。采用袖套管技術(shù)，將供體胸主動脈移植到受體腹主動脈，建立大鼠胸主動脈腹腔移植慢性排斥反應模型，于術(shù)后1周、2周

4、、3周、4周、8周、12周各取移植動脈行病理切片檢查。待套管法建立胸主動脈腹腔移植慢性排斥反應模型成功后，把36只同種異體胸主動脈腹腔移植大鼠及16只同系移植對照大鼠隨機分成4大組(每大組中，實驗小組9只，對照小組4只)：A大組，術(shù)后1周處死；B大組，術(shù)后2周處死；C大組，術(shù)后3周處死；D大組，術(shù)后4周處死。術(shù)前及處死時抽血分離留取血清，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清炎癥因子(CRP，IL-6，TNF-a)水平，處死后留取血管標本，HE染色

5、觀察血管病理改變，用免疫組織化學法檢測血管外膜炎癥細胞浸潤及a-肌動蛋白(a-actin)、周期蛋白依賴性激酶1(CDKl)、增殖細胞核抗原(PCNA)在血管壁中的表達。對比各組與術(shù)前血清炎癥因子水平變化及各組間觀察指標的變化。結(jié)果：利用袖套管技術(shù)建立大鼠胸主動脈腹腔移植慢性排斥反應模型，正式手術(shù)60只，手術(shù)成功55只，成功率91.7﹪，5只死亡(1只死于腰動脈受累；2只死于遲發(fā)腹腔出血；2只死于腹腔感染并發(fā)肺炎)。手術(shù)平均時間50mi

6、n，移植血管冷缺血時間15～20min，移植血管熱缺血時間3～8min(相當于腹主動脈阻斷時間)。移植動脈病理切片顯示，異系移植實驗組：術(shù)后第1周，外膜大量炎癥細胞浸潤；術(shù)后第2周，外膜有輕度膠原纖維增生伴炎癥浸潤；術(shù)后第4周，外膜明顯增厚，內(nèi)有大量增生的平滑肌細胞、膠原纖維及炎癥細胞，血管中層斷裂，可見外膜平滑肌細胞遷移至內(nèi)膜，內(nèi)膜亦出現(xiàn)明顯纖維化及平滑肌細胞增生；術(shù)后第12周，內(nèi)膜明顯增厚，平滑肌細胞增殖并伴有外膜炎癥浸潤。同系移植

7、對照組移植血管未見明顯改變。移植術(shù)后A、B、C、D四大組血清炎癥介質(zhì)水平均較術(shù)前基礎(chǔ)水平增高。C-反應蛋白(CRP)水平，各對照組及實驗組均較術(shù)前基礎(chǔ)水平明顯增高(P<0.01)，B、C、D大組中實驗小組較對照小組明顯升高(P<0.01)；白細胞介素6(interleukin-6，IL-6)水平，B大組的實驗小組較術(shù)前升高(P<0.05)，A、C、D大組的實驗小組較術(shù)前明顯升高(P<0.01)，A、B、C大組的對照小組較術(shù)前基礎(chǔ)水平升高

8、(P<0.05)，A、C、D大組的實驗小組較對照小組水平明顯升高(P<0.01)；腫瘤壞死因子(tumornecrosis factor-alpha，TNF-a)水平，A、B、C大組的實驗小組較術(shù)前升高(P<0.01)，D大組的實驗小組較術(shù)前明顯升高(P<0.01)，A、B、C、D大組的對照小組與術(shù)前相比無明顯變化。隨時間推移，血管外膜平滑肌細胞中，a-actin、PCNA和CDK1表達進行性增高(P<0.05)，且其表達早于內(nèi)膜。