RNAi技術(shù)抑制家蠶桿狀病毒增殖研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、RNA干擾(RNAi,RNAinterference)是dsRNA介導(dǎo)的特異性基因表達沉默現(xiàn)象,是生物界一種古老而且進化上高度保守的基因表達調(diào)節(jié)機制。RNAi在生物體中普遍存在,原蟲、線蟲、真菌、昆蟲以及哺乳類動物中都已發(fā)現(xiàn)RNAi現(xiàn)象。 本研究將IE-1基因+18~+446區(qū)以反向串聯(lián)方式連接,構(gòu)建在細胞內(nèi)能利用IE-1基因啟動子轉(zhuǎn)錄形成發(fā)夾狀dsRNA的RNAi表達載體pSK-IE,和轉(zhuǎn)基因RNAi載體pigA3-IE-Ne

2、o。將pSK-IE轉(zhuǎn)染細胞,注射蠶蛹均表現(xiàn)出對BmNPV抑制作用。表明IE.1啟動子可以用作構(gòu)建RNAiDNA載體的啟動子,轉(zhuǎn)染效率的高低直接影響到RNAi的檢測。用pigA3-IE-Neo轉(zhuǎn)染細胞,G418篩選4個月,獲得了轉(zhuǎn)oigA3-IE-Neo細胞,陽性率可達到80%。感染BmNPV后,轉(zhuǎn)基因細胞相比正常細胞表現(xiàn)出對BmNPV更強的抑制作用。另外,克隆了BmNPV的alk-exo基因,并構(gòu)建了基于alk-exo基因的系統(tǒng)進化樹;

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