昆蟲激素對家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)基因表達(dá)效率影響的研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文昆蟲激素對家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)基因表達(dá)效率影響的研究姓名：王厚偉申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：李衛(wèi)國張志芳2001.5.1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文有所下降：報告基因在蠶體中的有效表達(dá)時間可被延長6～8hr。5姍有兩種施用方法：添食和注射，添食施用刪以90ppm的濃度對報告基因表達(dá)量的提高效果最好，注射施用以4ug／頭姍的劑量為宜，其中，連同病毒液一次性注射施用姍對表達(dá)量的提高效果顯著好于添食使

2、用。隨著MH使用時間的推遲，報告基因的表達(dá)水平逐漸降低，結(jié)合對蠶體發(fā)育的影響，MH以在五齡起蠶后48hr與病毒液混合應(yīng)用為宜。在起蠶后48hr注射施用4ug，頭劑量的MH，在病毒感染的穩(wěn)定增長期(感染后84hr之前)，MH處理與CK之間報告基因的表達(dá)量沒有顯著差異，在對數(shù)增長期(感染后84～108hr)，MH處理的報告基因的表達(dá)量逐漸高于CK，至降解期(感染后120hr以后)盡管病蠶體重有所下降，但MH報告基因的表達(dá)量極顯著高于CK。不

3、同MH使用時間對感染wtBmNPV和rBmNPV家蠶的LT50的影響有顯著差異。早期使用MH，病蠶的LT50較長，晚期使用則顯著縮短。隨著MH使用時間的推遲，病蠶L，T5。總體變化趨勢是逐漸縮短，其中120hr使用MH較24hr使用MH病蠶的LT50縮短了近10hr。6低劑量的MH對BmBEVS報告基因在蛹體中表達(dá)量的提高效果較顯著，其中以2ug／頭MH劑量對polh基因和phy基因表達(dá)量的提高效果最好，與對照相比，polh基因的表達(dá)量

4、提高了60％左右，植酸酶基因的表達(dá)量提高了55％左右。就phy基因而言，其在姍處理的蛹體中的表達(dá)量從病毒感染后96hr開始極顯著高于對照，至感染后108hr，報告基因的表達(dá)量達(dá)最大值。7刪處理與病毒egt基因的缺失對感染家蠶桿狀病毒的家蠶前胸腺形態(tài)發(fā)育有顯著影響。姍處理健康蠶，前胸腺的發(fā)育和激素分泌受到抑制，前胸腺的大小顯著小于CK。wtBmNPV感染家蠶后，由于其基因組中的egt基因表達(dá)，使蠶體血淋巴中的蛻皮激素失去生理功能，為了維持

5、蠶體內(nèi)的激素平衡，前胸腺一直處于分泌狀態(tài)，從而促進(jìn)了前胸腺的發(fā)育，其個體大小遠(yuǎn)大于對照組。對感染wtBmNPV的家蠶同時使用刪后，外源的刪補(bǔ)償了因egt基因的表達(dá)而失活的姍，因此蠶體內(nèi)的激素基本處于正常狀態(tài)，前胸腺形態(tài)接近于cK。當(dāng)家蠶感染egt基因失活的重組病毒(DEGT)時，由于沒有egt基因產(chǎn)物對蠶體內(nèi)激素平衡的干擾，所以前胸腺的形態(tài)大致接近于對照組。而當(dāng)DEGT和姍共同作用于家蠶時，體內(nèi)過高的姍抑制了蠶體自身前胸腺的分泌功能，而

6、使前胸腺變小。8姍可促進(jìn)wtBmNPV在昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞中的復(fù)制與增殖。在培養(yǎng)的家蠶細(xì)胞(BmN)中，當(dāng)姍的使用劑量為3ug／ml培養(yǎng)基時，在病毒感染后60—72hr，培養(yǎng)基中芽生型wtBmNPV的數(shù)目增加了3倍左右。9BaffqPV和AcMNPV協(xié)同感染對家蠶五齡幼蟲LT。。有顯著影響，AcMNPV對接種低濃度的BmNPV在家蠶五齡幼蟲體內(nèi)的復(fù)制具有一定的抑制作用，使其LTso延長10hr左右，而對高接種濃度的BmNPV的抑制作用不明顯。